Kit de RT-qPCR directa
Descripción del equipo:
◮ El kit Direct RT-qPCR, que usa Foreasy Reverse Transcriptase y Foreasy HS Taq DNA Polymerase desarrollado por Foregene, con un tampón de reacción único, hace que este kit tenga una fuerte resistencia y compatibilidad, y puede probar directamente la reacción usando el sistema Foregene Lysis como plantilla.Este kit se puede aplicar para el desarrollo del kit de detección de ácido nucleico de COVID-19 y de otras bacterias patógenas.
Descripción
El kit Direct RT-qPCR proporciona un tampón RT-qPCR empaquetado por separado y una enzima de alta eficienciamezcla (Taq, M-MLV, RI), lo que lo hace conveniente para la creación de kits y sistemas de back-endajuste, dentro de una simple verificación.
Especificaciones
500T, 50,000T
Componentes del equipo
| Contenido del kit (sistema de reacción de 20 μL) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
| 500 toneladas | 50.000 toneladas | |
| Mezcla Directa de Enzimas | 500 l×1 | 50ml×1 |
| 2 × tampón de RT-qPCR directo | 1 ml×5 | 500ml×1 |
| Instrucción | 1 | 1 |
Pasos operativos
Antes de preparar los reactivos, todos los reactivos del kit deben descongelarse a temperatura ambiente y mezclarse suavemente.
A: Preparar of plantilla y reactivo
1. Prepare la plantilla de ARN preparada (se recomienda utilizar el kit de la serie Foregene Total RNA Isolation Kit para extraer y purificar la plantilla de ARN) o el producto de craqueo de muestras (se recomienda utilizar el sistema Foregene Lysis), cebadores específicos (10 μM) y otros consumibles relevantes, instrumento.
2. Coloque el tampón de RT-qPCR directo 2×, ddH2O sin ARNasa y el tinte de referencia ROX 20× (si es's necesario) en la caja con hielo, haciendo que estos se derritan naturalmente, y mezcle suavemente.
B: Preparar of RT-qPCR sistema
Mesa 1 : Preparar of RT-qPCR ssistema
| Componente | Volumen | concentración final |
| 2 × tampón de RT-qPCR directo | 10 l | 1× |
| Mezcla Directa de Enzimas | 1l | |
| Cebador directo (10 μM) | 0,8 l | 50-900nM |
| Cebador inverso (10 μM) | 0,8 l | 50-900nM |
| Sonda (4 μM) | 1l | 200nM |
| Plantilla (ARN o lisado) | X l | |
| 20 × Tinte de referencia ROX | - | 1* |
| ARNasa libreddH2O | (6.4-X) l | |
| Volumen total | 20l |
C: Colocar el RT-qPCR reacción programa
Mesa 2 : RT-qPCR reactivoon programa configuración (para ejemplo: dos-paso método)
| Paso | Temperatura | Tiempo | Ciclos | Contenido | |
| 1 | 50℃ | 15 minutos | 1* | 1 | Transcripción inversa |
| 2 | 95℃ | 1 minuto | 1 | Pre-desnaturalización | |
| 3 | 95℃ | 10 seg | 40-45 | desnaturalización | |
| 60℃ | 30 seg 2* | Recocido/Extensión | |||
Almacenamiento y vida útil
-El kit debe almacenarse a -20± 5℃.El período de validez es de 12 meses.
-Evitar ciclos repetidos de congelación-descongelación (<5 ciclos).
