Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready One-step qRT-PCR Kits
Descripciones
Este kit utiliza un sistema de tampón de lisis único que puede liberar rápidamente ARN de muestras de células cultivadas para reacciones de RT-qPCR, eliminando así el proceso de purificación de ARN laborioso y que requiere mucho tiempo.La plantilla de ARN se puede obtener en solo 7 minutos.los 5×Mezcla RT directa y 2×Los reactivos Direct qPCR Mix-SYBR proporcionados por el kit pueden obtener rápida y eficazmente resultados de PCR cuantitativos en tiempo real.
5×Mezcla RT directa y 2×Direct qPCR Mix-SYBR tiene una fuerte tolerancia a los inhibidores, y el lisado de las muestras se puede usar como plantilla para RT-qPCR directamente.Este kit contiene la exclusiva transcriptasa inversa Foregene de ARN de alta afinidad y la polimerasa de ADN Hot D-Taq, dNTP, MgCl2, tampón de reacción, optimizador de PCR y estabilizador.
Especificaciones
200×20μl Rxns, 1000×20μl Recetas
Componentes del equipo
| Parte I | Tampón CL |
| Proteasa Plus II de Foregene | |
| ST tampón | |
| Parte II | Borrador de ADN |
| 5 × mezcla directa de RT | |
| 2 × Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× Tinte de referencia ROX | |
| ddH2O sin ARNasa | |
| Instrucciones | |
Características y ventajas
■Simple y efectivo: con la tecnología Cell Direct RT, las muestras de ARN se pueden obtener en solo 7 minutos.
■ La demanda de muestra es pequeña, se pueden probar tan solo 10 celdas.
■ Alto rendimiento: puede detectar rápidamente ARN en células cultivadas en placas de 384, 96, 24, 12 y 6 pocillos.
■ DNA Eraser puede eliminar rápidamente los genomas liberados y reducir en gran medida el impacto en los resultados experimentales posteriores.
■ El sistema optimizado de RT y qPCR hace que la transcripción inversa de la RT-PCR de dos pasos sea más eficiente y que la PCR sea más específica y más resistente a los inhibidores de la reacción de la RT-qPCR.
Aplicación de kits
Ámbito de aplicación: células cultivadas.
- ARN liberado por lisis de la muestra: solo aplicable a la plantilla de RT-qPCR de este kit.
- El kit se puede utilizar para los siguientes fines: análisis de expresión génica, verificación del efecto de silenciamiento génico mediado por siRNA, cribado de fármacos, etc.
Diagrama
Almacenamiento y vida útil
La Parte I de este kit debe almacenarse a 4 ℃;La Parte II debe almacenarse a -20 ℃.
Foregene Protease Plus II debe almacenarse a 4℃, no congelar a -20 ℃.
Reactivo 2×Direct qPCR Mix-SYBR debe almacenarse a -20℃en la oscuridad;si se usa con frecuencia, también se puede almacenar a 4℃ para almacenamiento a corto plazo (agotar en 10 días).
Principios de diseño de cebadores de PCR en tiempo real
Cebador directo y cebador inverso
Para la PCR en tiempo real, el diseño del cebador es muy importante.Los cebadores están relacionados con la especificidad y la eficiencia de la amplificación por PCR y se pueden diseñar con referencia a los siguientes principios:
Longitud del cebador: 18-30 pb.
Contenido de GC: 40-60%.
Valor Tm: El software de diseño de cebadores, como Primer 5, puede proporcionar el valor Tm del cebador.Los valores de Tm de los cebadores aguas arriba y aguas abajo deben ser lo más parecidos posible.También se puede utilizar la fórmula de cálculo de Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Cuando se realiza la PCR, generalmente se selecciona una temperatura por debajo del valor Tm del cebador de 5 °C como la temperatura de hibridación (el aumento correspondiente en la temperatura de hibridación puede aumentar la especificidad de la reacción de PCR).
Cebadores y productos de PCR:
La longitud del producto de amplificación por PCR del cebador de diseño es preferentemente de 100-150 pb.
Deben evitarse en la medida de lo posible las imprimaciones de diseño en el área estructural secundaria de la plantilla.
Evite la formación de 2 o más bases complementarias entre los extremos 3 'de los cebadores aguas arriba y aguas abajo.
La base terminal 3′ del cebador no puede estar presente con 3 G o C consecutivas adicionales.
Los cebadores en sí mismos no pueden tener estructuras complementarias, de lo contrario se formará una estructura de horquilla que afectará la amplificación por PCR.
ATCG debe distribuirse lo más uniformemente posible en la secuencia del cebador, y la base terminal 3 'debe evitarse como T.
Apéndice 1: Paquete complementario de componentes del kit Cell Direct RT-qPCR
1.Solución de lisis celular
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| Componentes del equipo (sistema de lisis de 24 pozos / pozo) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 toneladas | 500 toneladas | ||
| ParteI | Tampón CL | 20ml | 100ml |
| Proteasa Plus II de Foregene | 400 ul | 1 ml × 2 | |
| ST tampón | 1 ml × 2 | 10ml | |
| ParteII | Borrador de ADN | 400 ul | 1 ml × 2 |
2. Mezcla RT
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| Componentes del equipo (sistema de reacción de 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 toneladas | |
| 5 × mezcla directa de RT | 800 ul |
| ddH sin ARNasa2O | 1,7 ml × 2 |
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| Componentes del equipo (sistema de reacción de 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 toneladas | 1000 toneladas | |
| 2 × Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× Tinte de referencia ROX | 40 l | 200 l |
| ddH sin ARNasa2O | 1,7ml | 10ml |
Manuales de instrucciones:
