Kit de aislamiento de ARN total de plantas Kit de purificación de ARN total para plantas bajas en polisacáridos y polifenoles
Especificaciones
50 preparaciones, 200 preparaciones
El kit utiliza la columna de centrifugación y la fórmula desarrollada por Foregene, que puede extraer eficientemente ARN total de alta pureza y alta calidad de varios tejidos vegetales con bajo contenido de polisacáridos y polifenoles.Para muestras de plantas con alto contenido de polisacáridos o polifenoles, se recomienda utilizar Plant Total RNA Isolation Plus Kit para obtener mejores resultados de extracción de ARN.El kit proporciona la columna de limpieza de ADN que puede eliminar fácilmente el ADN genómico del sobrenadante y el lisado de tejido.La columna de solo ARN puede unirse eficazmente al ARN.El kit puede procesar una gran cantidad de muestras al mismo tiempo.
El sistema completo no contiene ARNasa, por lo que el ARN purificado no se degradará.Buffer PRW1 y Buffer PRW2 pueden asegurar que el ARN obtenido no esté contaminado por proteínas, ADN, iones y compuestos orgánicos.
Componentes del equipo
| Búfer PSL1, Búfer PS, Búfer PSL2 |
| Tampón PRW1, Tampón PRW2 |
| ddH sin ARNasa2O, columna de limpieza de ADN |
| Columna de solo ARN |
| Instrucciones |
Características y ventajas
■ Operación a temperatura ambiente (15-25℃) durante todo el proceso, sin baño de hielo y centrifugación a baja temperatura.
■ Kit completo sin ARNasa, sin necesidad de preocuparse por la degradación del ARN.
■ La columna de limpieza de ADN se une específicamente al ADN, de modo que el kit puede eliminar la contaminación del ADN genómico sin agregar ADNasa.
■ Alto rendimiento de ARN: la columna de solo ARN y la fórmula única pueden purificar el ARN de manera eficiente.
■ Velocidad rápida: fácil de operar y se puede completar en 30 minutos.
■ Seguridad: no se requiere ningún reactivo orgánico.
■ Alta calidad: los fragmentos de ARN purificados son de alta pureza, libres de proteínas y otras impurezas, y pueden satisfacer varias aplicaciones experimentales posteriores.
Aplicación de kits
Es adecuado para la extracción y purificación de ARN total a partir de muestras de tejido vegetal fresco o congelado (especialmente tejido de hojas de plantas frescas) con bajo contenido de polisacáridos y polifenoles.
flujo de trabajo
Diagrama
Plant Total RNA Isolation Kit Plus procesó 50 mg de hojas frescas de polisacáridos y polifenoles, y se analizó el 5% de ARN purificado mediante electroforesis.
1: plátano
2: ginkgo
3: Algodón
4: granada
Almacenamiento y vida útil
El kit se puede almacenar durante 12 meses a temperatura ambiente (15 a 25 ℃) en un ambiente seco y de 2 a 8 ℃ durante más tiempo (24 meses).
El tampón PSL1 se puede almacenar a 4 ℃ durante 1 mes después de agregar 2-hidroxi-1-etanotiol (opcional).
Guía de análisis de problemas
El siguiente análisis de los problemas que puede encontrar enPlanta TotalRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
La columna de centrifugado está obstruida.
El bloqueo de la columna de centrifugación hará que el rendimiento de ARN se reduzca o incluso que no se pueda purificar para obtener ARN, y la calidad del ARN obtenido será baja.
Análisis de causa común:
1. La muestra no se rompe por completo.
La fragmentación incompleta de la muestra puede bloquear la columna de limpieza de ADN, lo que también puede afectar el rendimiento y la calidad del ARN.Recomendamos que al realizar la fragmentación de la muestra, triture rápidamente cantidades suficientes de nitrógeno líquido para romper los tejidos, como las paredes celulares y las membranas celulares de las muestras tanto como sea posible.Para muestras de plantas de polifenoles polisacáridos, le recomendamos que utilice Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2. Aspire el sobrenadante aislado de la columna de limpieza de ADN, aspire el posible sedimento de restos celulares.
El sedimento de restos celulares aspirado puede obstruir la columna de solo ARN durante los procedimientos de adsorción de ARN (consulte el paso 5 del procedimiento, el paso 6 del procedimiento de polifenoles de polisacáridos).Recomendamos que se tenga cuidado al aspirar este sobrenadante para evitar que se aspiren restos celulares.
3. La cantidad inicial de muestra es demasiado grande.
El uso excesivo de la muestra dará como resultado una fragmentación incompleta de la muestra o una lisis incompleta de las células por parte del tampón PRL1 o el tampón PSL1, lo que provocará la obstrucción de la columna de purificación para las operaciones de purificación.Plant Total RNA Isolation Kit tiene un máximo inicial de 50 mg por purificación única de una muestra operada.Para muestras de plantas de polifenol polisacáridos, le recomendamos que pruebe el Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. La temperatura de la centrífuga es demasiado baja.
Aislamiento y purificación de ARN completo, excepto la alteración con nitrógeno líquido del tejido de la muestra, todos los pasos se realizan a temperatura ambiente (20-25 °C).Algunas centrífugas de baja temperatura tienen temperaturas inferiores a 20 °C, lo que puede causar bloqueos en la columna de limpieza de ADN y/o la columna de solo ARN.Si esto ocurre, ajuste la temperatura de la centrífuga a 20-25 °C y precaliente la mezcla de lisis y/o la adición de sobrenadante de separación de etanol a 37 °C.
No se extrajo ARN o el rendimiento de ARN es bajo
Por lo general, hay muchos factores que afectan la eficiencia de la recuperación, como: el contenido de ARN de la muestra, el método de operación, el volumen de elución, etc.
Análisis de las causas comunes de la siguiente manera:
1. Se realizó un baño de hielo o una centrifugación a baja temperatura (4 °C) durante la operación.
Sugerencia: Opere a temperatura ambiente (15-25°C) en todo el proceso, no haga baño de hielo ni centrifugación a baja temperatura.
2.El ARN se ha degradado debido a una conservación inadecuada de la muestra oa una conservación a largo plazo de la muestra.
Recomendación: las muestras recién recolectadas deben congelarse rápidamente en nitrógeno líquido y luego almacenarse a -80 ° C durante mucho tiempo, evitar la congelación y descongelación repetidas de las muestras;o sumerja inmediatamente las muestras en solución RNAlater de estabilizador de ARN (muestras de animales).
3.La fragmentación y la lisis insuficientes de la muestra conducen al bloqueo de la columna de purificación.
Sugerencia: Al triturar el tejido, asegúrese de que esté lo suficientemente triturado y transfiéralo rápidamente al tampón PSL1 preparado previamente (confirme que se haya agregado la proporción correcta de β-ME, consulte el paso 1 del procedimiento).
4.El eluyente se agregó incorrectamente.
Sugerencia: asegúrese de que ddH sin ARNasa2El O se gotea en el medio de la membrana de la columna de purificación.
5. No se agregó el volumen correcto de etanol absoluto al tampón PSL2 o al tampón PRW2.
Sugerencia: siga las instrucciones, agregue el volumen correcto de etanol absoluto a Buffer PSL2 y Buffer PRW2 y mezcle bien antes de usar el kit.
6. La cantidad de muestra de tejido es inadecuada.
Sugerencia: Utilizar 50 mg de tejido por 500 μl de Buffer PSL1.El uso de demasiado tejido reducirá la cantidad de ARN extraído y también se reducirá la pureza del ARN resultante.Recomendamos encarecidamente que la dosis inicial de la muestra no supere los 50 mg por operación de extracción de ARN.
7. Volumen de elución inadecuado o elución incompleta.
Sugerencia: El volumen de eluyente de la columna de purificación es de 50-200 μl;si el efecto de elución no es satisfactorio, se recomienda prolongar el tiempo a temperatura ambiente después de añadir ddH sin ARNasa precalentado2O, como 5-10min.
8. La columna de purificación tiene residuos de etanol después de lavar con Buffer PRW2.
Sugerencia: si el tubo vacío se centrifuga durante 1 min y aún queda etanol después del lavado en el tampón PRW2, puede aumentar el tiempo de centrifugado del tubo vacío a 2 min o colocar la columna de purificación a temperatura ambiente durante 5 min para eliminar completamente el etanol residual.
9. El kit se utilizó incorrectamente.
Sugerencia: para muestras de plantas de polisacáridos polifenólicos, es posible que no se puedan obtener muestras de ARN ideales si se usan kits comunes como el kit de aislamiento de ARN total de plantas.Le recomendamos que utilice Plant Total RNA IsolationKit Plus, que está especialmente diseñado para muestras de plantas de polisacáridos polifenólicos.Un kit especialmente desarrollado para la extracción de ARN de muestras vegetales de polifenoles y polisacáridos.
El valor OD260/OD280 es bajo
Elución de ARN con ddH2O y se utiliza para las lecturas del espectrofotómetro da como resultado valores bajos de OD260/OD280.Recomendamos utilizar Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 (en lugar de ddH sin ARNasa).2O para eluir el ARN) para obtener valores de OD260/OD280 relativamente correctos, consulte “Ensayos de concentración y purificación de ARN” en la página 19.
El ARN purificado se degrada
La calidad del ARN purificado está relacionada con factores como la conservación de la muestra, la contaminación por ARNasa y la manipulación.
Análisis de causas comunes:
1. Las muestras de tejido no se almacenaron a tiempo después de la recolección.
Recomendación: si las muestras de tejido no se usan a tiempo después de la recolección, guárdelas en nitrógeno líquido a baja temperatura inmediatamente o transfiéralas a -80 °C para almacenamiento a largo plazo después de congelarlas rápidamente en nitrógeno líquido, o sumerja inmediatamente las muestras en una solución estabilizadora de ARN RNAlater (muestras de animales).Para la extracción de ARN, intente utilizar muestras de tejido recién recolectadas.
2. Congelación y descongelación repetida de muestras de tejido.
Sugerencia: cuando almacene muestras de tejido, es mejor cortarlas en pedazos pequeños para su conservación y sacar una parte de ellos cuando los use para evitar la degradación del ARN causada por la congelación y descongelación repetidas de las muestras.
3. Se introduce ARNasa en el quirófano o no se utilizan guantes desechables, mascarillas, etc.
Sugerencia: los experimentos de extracción de ARN se realizan mejor en operaciones de ARN separadas, y la mesa del laboratorio debe limpiarse antes del experimento, y deben usarse guantes y máscaras desechables durante el experimento para evitar la degradación del ARN causada por la introducción de RNasa en la mayor medida posible.
4.El reactivo está contaminado por RNase durante el uso.
Sugerencia: reemplazar con una nueva serie de kits de extracción de ARN total de plantas para experimentos relacionados.
5. Los tubos de centrífuga y las puntas de pipeta que se utilizan para manipular el ARN están contaminados con ARNasa.
Sugerencia: asegúrese de que los tubos de centrífuga, las puntas de las pipetas, las pipetas, etc. que se utilizan en la extracción de ARN no contengan ARNasa.
Manuales de instrucciones:
Manual de instrucciones del kit de aislamiento de ARN total de plantas
