Kit de RT-qPCR directa II
Descripción del equipo:
◮El kit Direct RT-qPCR, que usa Foreasy Reverse Transcriptase y Foreasy HS Taq DNA Polymerase desarrollado por Foregene, con un tampón de reacción único, hace que este kit tenga una fuerte resistencia y compatibilidad, y puede probar directamente la reacción usando el sistema Foregene Lysis como plantilla.Este kit se puede aplicar para el desarrollo del kit de detección de ácido nucleico de COVID-19 y de otras bacterias patógenas.
Descripción
El kit Direct RT-qPCR proporciona tampón RT-qPCR empaquetado por separado, polimerasa de ADN Foreasy HS Taq de alta eficienciay Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),haciéndolo conveniente para la creación de kits de back-end y ajuste del sistema, dentro de una simple verificación.
El kit Direct RT-qPCR, que usa Foreasy Reverse Transcriptase y Foreasy HS Taq DNA Polymerase desarrollado por Foregene, con un tampón de reacción único, hace que este kit tenga una fuerte resistencia y compatibilidad, y puede probar directamente la reacción usando el sistema Foregene Lysis como plantilla.Este kit se puede aplicar para el desarrollo del kit de detección de ácido nucleico de COVID-19 y de otras bacterias patógenas.
Este kit puede ser directamente el componente del producto IVD, usándose fácil y rápidamente.Solo necesita una fácil verificación, sin volver a desarrollar.
Especificaciones
500T, 50,000T
Componentes del equipo
| Contenido del kit (sistema de reacción de 20 μL) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 toneladas | 50.000 toneladas | |
| Forfácil Rtranscriptasa inversa (200U/μL) | 50 l×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq ADN polimerasa (5U/μL) | 100 l×1 | 1 ml×10 |
| 2 × RT-qPCR directaBuffer | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Instrucción | 1 | 1 |
Pasos operativos
A: preparación de plantilla y reactivo
1. Prepare la plantilla de ARN preparada (se recomienda utilizar el kit de la serie Foregene Total RNA Isolation Kit para extraer y purificar la plantilla de ARN) o el producto de craqueo de muestras (se recomienda utilizar el sistema Foregene Lysis), cebadores específicos (10 μM) y otros consumibles relevantes, instrumento.
2. Coloque el tampón de RT-qPCR directo x2, la ddH2O libre de ARNasa y el colorante de referencia ROX x2 (si es necesario) en la caja con hielo, haciendo que se derritan de forma natural, y mezcle suavemente.
B: Preparación del sistema RT-qPCR
Obtenga la mitad del volumen de tampón de reacción del sistema de reacción (por ejemplo, si el volumen del sistema es de 20 μL, necesita obtener 10 μL 2 × Direct RT-qPCR Buffer). Paracantidad correspondiente de enzima, sugerimos queM-MLV：10-30 U/20 μL sistema de reacción,TaqADN polimerasa：1-2 U/20 μL sistema de reacciónesta es nuestra sugerencia, debe probarla y ajustarla), agregue plantilla de ARN, cebadores y sondas específicos, y agregue ddH sin ARNasa2O a 20 μL.La preparación específica del sistema de reacción RT-qPCR se puede consultar en la siguiente tabla 1.
Tabla 1: Preparación del sistema RT-qPCR
| Componente | Volumen | concentración final |
| 2 × tampón de RT-qPCR directo | 10 l | 1× |
| Transcriptasa inversa Foreasy (MMLV) | 10-30U | |
| Foreasy HS Taq ADN polimerasa | 1-2U | |
| Cebador directo (10 μM) | 0,8 l | 50-900nM |
| Cebador inverso (10 μM) | 0,8 l | 50-900nM |
| Sonda (4 μM) | 1 l | 200nM |
| Plantilla (ARN o lisado) | X l | |
| 20× Tinte de referencia ROX | - | 1* |
| RNasa-FreeddH2O | (6.4-X) l | |
| Volumen total | 20 l |
Nota: El cebador directo y el cebador inverso son cebadores específicos del gen objetivo.El sistema de la qPCR podría ajustarse según modelos prácticos experimentales y de PCR.Recomendamos 400 nM para la concentración final de la mayoría de los primers.Ajuste el volumen de cebadores y sondas específicos según la concentración preparada y la concentración final recomendada, por favor.
1*: Seleccione la concentración final adecuada de ROX Reference Dye de acuerdo con diferentes instrumentos de PCR cuantitativos.La concentración óptima de colorante de referencia ROX de los instrumentos de PCR cuantitativos comunes se muestra en la siguiente tabla:
| Instrumentos de PCR cuantitativa | Concentración final de ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Paso Uno,etc. | 1 × (por ejemplo, agregue 1 μl de colorante de referencia 20 × ROX en un sistema de reacción de 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P y Mx4000, etc. | 0,5× (por ejemplo, agregue 0,5 μl de colorante de referencia ROX 20× en un sistema de reacción de 20 μL) |
| Instrumento PCR Roche, instrumento PCR Bio-Rad, instrumento PCR cuantitativo Eppendorf, etc. | Sin colorante de referencia ROX |
Almacenamiento y vida útil
El kit debe almacenarse a -20 ± 5 ℃.Debe almacenarse inmediatamente en un refrigerador termostático de -20 ℃.El período de validez es de 2 años si se almacena en condiciones adecuadas.
