(96 pocillos) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
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El(96 pocillos) QuickEasyTM Kit Cell Direct RT-qPCR–SYBR Verde Iproporcionaun sistema tampón de lisis únicoto liberar rápidamente el ARNde células cultivadasmuestras para reacciones de RT-qPCR, eliminando el laborioso y lentoProceso de purificación de ARN, y solo toma 7 minutos obtener la plantilla de ARN requerida.El5 × mezcla directa de RTy2 × Direct qPCR Mix-SYBRproporcionado en la caja puede rápida yobtener efectivamente datos cuantitativos en tiempo realresultados de PCR.
5× Direct RT Mix y 2× Direct qPCR Mix-SYBR tienen una fuerte tolerancia a los inhibidores y pueden usar el lisado de la muestra que se analizará como plantilla para una transcripción inversa eficiente y una amplificación específica.El reactivo contiene transcriptasa inversa única de Foregene con alta afinidad por el ARN, así como ADN polimerasa Hot D-Taq, dNTP, MgCl2 , tampón de reacción, optimizador y estabilizador de PCR, y se puede usar junto con el tampón de lisis para detectar la muestra de forma rápida, fácil y precisa, y tiene las características de alta sensibilidad, fuerte especificidad y buena estabilidad.
El kit está destinado a la lisis de microsistemas de células cultivadas de 96 pocillos y tiene buena uniformidad y consistencia;los componentes del kit proporcionan 96 reacciones de lisis, 96 reacciones de transcripción inversa y 96 × 2 qPCR reacciones, que pueden cumplir con la placa de células de 96 pocillos para un solo uso, evitando la contaminación causada por la apertura, congelación y descongelación repetidas de los reactivos y la degradación del rendimiento del reactivo.
Componentes del equipo
| Composición de la equipación ( 50 μL sistema de lisis/20 lRT sistema de reacción /20μL sistema de reacción qPCR) | DRT-03011 | Observación | |
| 96T | |||
| ParteI | BufferCL | 5ml | Celúlalisis |
| ForegeneProteasa Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Parte II | ADNBorrador | 100 μL | |
| 5 × mezcla directa de RT | 400 μL | RT | |
| 2 × mezcla directa de qPCR-SYBR | 1 metroL × 2 | qPCR | |
| 50× Tinte de referencia ROX | 400µL | ||
| ARNasa- GratisddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Manuales | 1 pedazo | 1 porcion | |
*: El reactivo de lisis DNA Eraser se incluye en la Parte II del kit;Los componentes Cell Lysis, RT y qPCR se pueden comprar por separado.
Características y ventajas
■Simple y efectivo: con la tecnología Cell Direct RT, las muestras de ARN se pueden obtener en solo 7 minutos.
■ La demanda de muestra es pequeña, se pueden probar tan solo 10 celdas.
■ Alto rendimiento: puede detectar rápidamente ARN en células cultivadas en placas de 384, 96, 24, 12 y 6 pocillos.
■ DNA Eraser puede eliminar rápidamente los genomas liberados y reducir en gran medida el impacto en los resultados experimentales posteriores.
■ El sistema optimizado de RT y qPCR hace que la transcripción inversa de la RT-PCR de dos pasos sea más eficiente y que la PCR sea más específica y más resistente a los inhibidores de la reacción de la RT-qPCR.
Aplicación de kits
Ámbito de aplicación: células cultivadas.
- ARN liberado por lisis de la muestra: solo aplicable a la plantilla de RT-qPCR de este kit.
- El kit se puede utilizar para los siguientes fines: análisis de expresión génica, verificación del efecto de silenciamiento génico mediado por siRNA, cribado de fármacos, etc.
Almacenamiento y vida útil
La Parte I de este kit debe almacenarse a las 4℃;La Parte II debe almacenarse a -20 ℃.
Foregene Protease Plus II debe almacenarse a 4℃, no congelar a -20 ℃.
Reactivo 2×Direct qPCR Mix-Taqman debe almacenarse a -20℃en la oscuridad;si se usa con frecuencia, también se puede almacenar a 4℃ para almacenamiento a corto plazo (agotar en 10 días).
Principios de diseño de cebadores de PCR en tiempo real
Cebador directo y cebador inverso
Para la PCR en tiempo real, el diseño del cebador es muy importante.Los cebadores están relacionados con la especificidad y la eficiencia de la amplificación por PCR y se pueden diseñar con referencia a los siguientes principios:
- Longitud del cebador: 18-30 pb.
- Contenido de GC: 40-60%.
- Valor Tm: El software de diseño de cebadores, como Primer 5, puede proporcionar el valor Tm del cebador.Los valores de Tm de los cebadores aguas arriba y aguas abajo deben ser lo más parecidos posible.También se puede utilizar la fórmula de cálculo de Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Cuando se realiza la PCR, generalmente se selecciona una temperatura por debajo del valor Tm del cebador de 5 °C como la temperatura de hibridación (el aumento correspondiente en la temperatura de hibridación puede aumentar la especificidad de la reacción de PCR).
- Cebadores y productos de PCR:
- La longitud del producto de amplificación por PCR del cebador de diseño es preferentemente de 100-150 pb.
- Deben evitarse en la medida de lo posible las imprimaciones de diseño en el área estructural secundaria de la plantilla.
- Evite la formación de 2 o más bases complementarias entre los extremos 3 'de los cebadores aguas arriba y aguas abajo.
- La base terminal 3′ del cebador no puede estar presente con 3 G o C consecutivas adicionales.
- Los cebadores en sí mismos no pueden tener estructuras complementarias, de lo contrario se formará una estructura de horquilla que afectará la amplificación por PCR.
- ATCG debe distribuirse lo más uniformemente posible en la secuencia del cebador, y la base terminal 3 'debe evitarse como T.
Apéndice1:Ctodo directoRT-qPCR Componente del kitpaquete de suplemento t
1. Solución de lisis celular
| Solución de lisis celular | |||
| Componentes del equipo (sistema de lisis de 24 pozos / pozo) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 toneladas | 500 toneladas | ||
| ParteI | Tampón CL | 20ml | 100ml |
| Proteasa Plus II de Foregene | 400 ul | 1 ml × 2 | |
| ST tampón | 1 ml × 2 | 10ml | |
| ParteII | Borrador de ADN | 400 ul | 1 ml × 2 |
| Mezcla RT | |
| Componentes del equipo (sistema de reacción de 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 toneladas | |
| 5 × mezcla directa de RT | 800 ul |
| ddH sin ARNasa2O | 1,7 ml × 2 |
| Mezcla qPCR | ||
| Componentes del equipo (sistema de reacción de 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 toneladas | 1000 toneladas | |
| 2 × Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× Tinte de referencia ROX | 40 l | 200 l |
| ddH sin ARNasa2O | 1,7ml | 10ml |
Manuales de instrucciones:
