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Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-step qRT-PCR Kits Probe

Descripción del equipo:

N.° de cat. DRT-01021/01022

Para RT-qPCR directa de células usando ≤ 1 000 000 células,

y realizar RT qPCR directamente a partir de células sin purificación previa de ARN.

Las células se lisan directamente para liberar ARN para RT-qPCR;el sistema de alta tolerancia hace innecesario purificar el ARN y usar lisados ​​celulares directamente como moldes de ARN para las reacciones de RT.Rápido y conveniente;Alta sensibilidad, fuerte especificidad y buena estabilidad.

◮Simple y efectivo: con la tecnología Cell Direct RT, las muestras de ARN se pueden obtener en solo 7 minutos.

La demanda de muestra es pequeña, se pueden probar tan solo 10 celdas.

◮Alto rendimiento: puede detectar rápidamente ARN en células cultivadas en placas de 384, 96, 24, 12, 6 pocillos.

DNA Eraser puede eliminar rápidamente los genomas liberados y reducir en gran medida el impacto en los resultados experimentales posteriores.

El sistema optimizado de RT y qPCR hace que la transcripción inversa de RT-PCR de dos pasos sea más eficiente y que la PCR sea más específica y más resistente a los inhibidores de la reacción de RT-qPCR.


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  • Detalle del producto

    Etiquetas de productos

    Preguntas más frecuentes

    Descargar Recursos

    Descripciones

    Este producto utiliza un sistema de tampón de lisis único para liberar rápidamente el ARN de las muestras de células cultivadas para las reacciones de RT-qPCR, eliminando el laborioso y lento proceso de purificación del ARN, y solo 7 minutos para obtener la plantilla de ARN requerida, con 5x Direct RT Mix, 2x Direct qPCR Mix-Taqman proporcionado por el kit puede obtener rápida y eficientemente resultados de PCR cuantitativos en tiempo real.

    5× Direct RT Mix y 2× Direct qPCR Mix-Taqman tienen una fuerte tolerancia a los inhibidores y pueden realizar una reversión eficiente y una amplificación específica utilizando el lisado de la muestra que se va a medir como plantilla.El reactivo contiene Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer and Stabilizer, que se puede utilizar con lysis buffer para detectar muestras rápida y fácilmente, y tiene las características de alta sensibilidad, especificidad y estabilidad.

    Especificaciones

    200×20μl Rxns, 1000×20μl Recetas

    Componentes del equipo

    RápidoFácilTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman

    Componentes del equipo

    Sistema de reacción qPCR de 20 μl

    DRT-01021 DRT-01022  

    Nota

    200 toneladas 1000 toneladas
     

     

    Parte I

    Tampón CL 4ml 20ml  

     lisis celular

    Proteasa Plus II de Foregene 80 ul 400 ul
    ST tampón 400 ul 1 ml × 2
     

     

     

    Parte II

    Borrador de ADN 80 ul 400 ul
    5 × mezcla directa de RT * 160 l 800 ul RT
    2 × Direct qPCR Mix-Taqman * 1 ml × 2 1,7 ml × 6  

    qPCR

    20 × Tinte de referencia ROX 40 l 200 l
    ddH sin ARNasa2O 1,7ml 10ml  

    Manual de instrucciones

    1 pieza

    1 pieza

     

    *:Cell Lysis, 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman se pueden comprar por separado

    Características y ventajas

    Simple y efectivo: con la tecnología Cell Direct RT, las muestras de ARN se pueden obtener en solo 7 minutos.

    ■ La demanda de muestra es pequeña, se pueden probar tan solo 10 celdas.

    ■ Alto rendimiento: puede detectar rápidamente ARN en células cultivadas en placas de 384, 96, 24, 12 y 6 pocillos.

    ■ DNA Eraser puede eliminar rápidamente los genomas liberados y reducir en gran medida el impacto en los resultados experimentales posteriores.

    ■ El sistema optimizado de RT y qPCR hace que la transcripción inversa de la RT-PCR de dos pasos sea más eficiente y que la PCR sea más específica y más resistente a los inhibidores de la reacción de la RT-qPCR.

    Aplicación de kits

    Ámbito de aplicación: células cultivadas.

    - ARN liberado por lisis de la muestra: solo aplicable a la plantilla de RT-qPCR de este kit.

    - El kit se puede utilizar para los siguientes fines: análisis de expresión génica, verificación del efecto de silenciamiento génico mediado por siRNA, cribado de fármacos, etc.

    Almacenamiento y vida útil

    La Parte I de este kit debe almacenarse a las 4;La Parte II debe almacenarse a -20 ℃.

     Foregene Protease Plus II debe almacenarse a 4℃, no congelar a -20 ℃.

     Reactivo 2×Direct qPCR Mix-Taqman debe almacenarse a -20en la oscuridad;si se usa con frecuencia, también se puede almacenar a 4℃ para almacenamiento a corto plazo (agotar en 10 días).


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  • Principios de diseño de cebadores de PCR en tiempo real

    Cebador directo y cebador inverso

    Para la PCR en tiempo real, el diseño del cebador es muy importante.Los cebadores están relacionados con la especificidad y la eficiencia de la amplificación por PCR y se pueden diseñar con referencia a los siguientes principios:

    • Longitud del cebador: 18-30 pb.
    • Contenido de GC: 40-60%.
    • Valor Tm: El software de diseño de cebadores, como Primer 5, puede proporcionar el valor Tm del cebador.Los valores de Tm de los cebadores aguas arriba y aguas abajo deben ser lo más parecidos posible.También se puede utilizar la fórmula de cálculo de Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Cuando se realiza la PCR, generalmente se selecciona una temperatura por debajo del valor Tm del cebador de 5 °C como la temperatura de hibridación (el aumento correspondiente en la temperatura de hibridación puede aumentar la especificidad de la reacción de PCR).
    • Cebadores y productos de PCR:
    1. La longitud del producto de amplificación por PCR del cebador de diseño es preferentemente de 100-150 pb.
    2. Deben evitarse en la medida de lo posible las imprimaciones de diseño en el área estructural secundaria de la plantilla.
    3. Evite la formación de 2 o más bases complementarias entre los extremos 3 'de los cebadores aguas arriba y aguas abajo.
    4. La base terminal 3′ del cebador no puede estar presente con 3 G o C consecutivas adicionales.
    5. Los cebadores en sí mismos no pueden tener estructuras complementarias, de lo contrario se formará una estructura de horquilla que afectará la amplificación por PCR.
    6. ATCG debe distribuirse lo más uniformemente posible en la secuencia del cebador, y la base terminal 3 'debe evitarse como T.

    Apéndice1:Ctodo directoRT-qPCR Componente del kitpaquete de suplemento t

    1. Solución de lisis celular

    Solución de lisis celular

    Componentes del equipo

    (sistema de lisis de 24 pozos / pozo)

    DRT-01011-A1

    DRT-01011-A2

    100 toneladas

    500 toneladas

    ParteI

    Tampón CL

    20ml

    100ml

    Proteasa Plus II de Foregene

    400 ul

    1 ml × 2

    ST tampón

    1 ml × 2

    10ml

    ParteII

    Borrador de ADN

    400 ul

    1 ml × 2

    2. Mezcla RT

    Mezcla RT

    Componentes del equipo

    (sistema de reacción de 20 μl)

    DRT-01011-B1

    200 toneladas

    5 × mezcla directa de RT

    800 ul

    ddH sin ARNasa2O

    1,7 ml × 2

    3Mezcla .qPCR

    Mezcla qPCR

    Componentes del equipo

    (sistema de reacción de 20 μl)

    DRT-01021-C1

    DRT-01021-C2

    200 toneladas

    1000 toneladas

    2 × Direct qPCR Mix-Taqman

    1 ml × 2

    1,7 ml × 6

    20× Tinte de referencia ROX

    40 l

    200 l

    ddH sin ARNasa2O

    1,7ml

    10ml

     

    Manuales de instrucciones:

     Quick Easy Cell Direct RT-qPCR Kit-Taqman

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