Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-step qRT-PCR Kits Probe
Descripciones
Este producto utiliza un sistema de tampón de lisis único para liberar rápidamente el ARN de las muestras de células cultivadas para las reacciones de RT-qPCR, eliminando el laborioso y lento proceso de purificación del ARN, y solo 7 minutos para obtener la plantilla de ARN requerida, con 5x Direct RT Mix, 2x Direct qPCR Mix-Taqman proporcionado por el kit puede obtener rápida y eficientemente resultados de PCR cuantitativos en tiempo real.
5× Direct RT Mix y 2× Direct qPCR Mix-Taqman tienen una fuerte tolerancia a los inhibidores y pueden realizar una reversión eficiente y una amplificación específica utilizando el lisado de la muestra que se va a medir como plantilla.El reactivo contiene Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer and Stabilizer, que se puede utilizar con lysis buffer para detectar muestras rápida y fácilmente, y tiene las características de alta sensibilidad, especificidad y estabilidad.
Especificaciones
200×20μl Rxns, 1000×20μl Recetas
Componentes del equipo
RápidoFácilTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
Componentes del equipo Sistema de reacción qPCR de 20 μl | DRT-01021 | DRT-01022 | Nota | |
200 toneladas | 1000 toneladas | |||
Parte I | Tampón CL | 4ml | 20ml | lisis celular |
Proteasa Plus II de Foregene | 80 ul | 400 ul | ||
ST tampón | 400 ul | 1 ml × 2 | ||
Parte II | Borrador de ADN | 80 ul | 400 ul | |
5 × mezcla directa de RT * | 160 l | 800 ul | RT | |
2 × Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
20 × Tinte de referencia ROX | 40 l | 200 l | ||
ddH sin ARNasa2O | 1,7ml | 10ml | ||
Manual de instrucciones | 1 pieza | 1 pieza |
*:Cell Lysis, 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman se pueden comprar por separado
Características y ventajas
■Simple y efectivo: con la tecnología Cell Direct RT, las muestras de ARN se pueden obtener en solo 7 minutos.
■ La demanda de muestra es pequeña, se pueden probar tan solo 10 celdas.
■ Alto rendimiento: puede detectar rápidamente ARN en células cultivadas en placas de 384, 96, 24, 12 y 6 pocillos.
■ DNA Eraser puede eliminar rápidamente los genomas liberados y reducir en gran medida el impacto en los resultados experimentales posteriores.
■ El sistema optimizado de RT y qPCR hace que la transcripción inversa de la RT-PCR de dos pasos sea más eficiente y que la PCR sea más específica y más resistente a los inhibidores de la reacción de la RT-qPCR.
Aplicación de kits
Ámbito de aplicación: células cultivadas.
- ARN liberado por lisis de la muestra: solo aplicable a la plantilla de RT-qPCR de este kit.
- El kit se puede utilizar para los siguientes fines: análisis de expresión génica, verificación del efecto de silenciamiento génico mediado por siRNA, cribado de fármacos, etc.
Almacenamiento y vida útil
La Parte I de este kit debe almacenarse a las 4℃;La Parte II debe almacenarse a -20 ℃.
Foregene Protease Plus II debe almacenarse a 4℃, no congelar a -20 ℃.
Reactivo 2×Direct qPCR Mix-Taqman debe almacenarse a -20℃en la oscuridad;si se usa con frecuencia, también se puede almacenar a 4℃ para almacenamiento a corto plazo (agotar en 10 días).
Principios de diseño de cebadores de PCR en tiempo real
Cebador directo y cebador inverso
Para la PCR en tiempo real, el diseño del cebador es muy importante.Los cebadores están relacionados con la especificidad y la eficiencia de la amplificación por PCR y se pueden diseñar con referencia a los siguientes principios:
- Longitud del cebador: 18-30 pb.
- Contenido de GC: 40-60%.
- Valor Tm: El software de diseño de cebadores, como Primer 5, puede proporcionar el valor Tm del cebador.Los valores de Tm de los cebadores aguas arriba y aguas abajo deben ser lo más parecidos posible.También se puede utilizar la fórmula de cálculo de Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Cuando se realiza la PCR, generalmente se selecciona una temperatura por debajo del valor Tm del cebador de 5 °C como la temperatura de hibridación (el aumento correspondiente en la temperatura de hibridación puede aumentar la especificidad de la reacción de PCR).
- Cebadores y productos de PCR:
- La longitud del producto de amplificación por PCR del cebador de diseño es preferentemente de 100-150 pb.
- Deben evitarse en la medida de lo posible las imprimaciones de diseño en el área estructural secundaria de la plantilla.
- Evite la formación de 2 o más bases complementarias entre los extremos 3 'de los cebadores aguas arriba y aguas abajo.
- La base terminal 3′ del cebador no puede estar presente con 3 G o C consecutivas adicionales.
- Los cebadores en sí mismos no pueden tener estructuras complementarias, de lo contrario se formará una estructura de horquilla que afectará la amplificación por PCR.
- ATCG debe distribuirse lo más uniformemente posible en la secuencia del cebador, y la base terminal 3 'debe evitarse como T.
Apéndice1:Ctodo directoRT-qPCR Componente del kitpaquete de suplemento t
1. Solución de lisis celular
Solución de lisis celular | |||
Componentes del equipo (sistema de lisis de 24 pozos / pozo) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 toneladas | 500 toneladas | ||
ParteI | Tampón CL | 20ml | 100ml |
Proteasa Plus II de Foregene | 400 ul | 1 ml × 2 | |
ST tampón | 1 ml × 2 | 10ml | |
ParteII | Borrador de ADN | 400 ul | 1 ml × 2 |
Mezcla RT | |
Componentes del equipo (sistema de reacción de 20 μl) | DRT-01011-B1 |
200 toneladas | |
5 × mezcla directa de RT | 800 ul |
ddH sin ARNasa2O | 1,7 ml × 2 |
Mezcla qPCR | ||
Componentes del equipo (sistema de reacción de 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
200 toneladas | 1000 toneladas | |
2 × Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
20× Tinte de referencia ROX | 40 l | 200 l |
ddH sin ARNasa2O | 1,7ml | 10ml |
Manuales de instrucciones: