Guías para el análisis de problemas

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

No se puede extraer ARN o el rendimiento de ácido nucleico es bajo

Por lo general, hay muchos factores que afectan la eficiencia de la recuperación, como: el contenido de ARN de la muestra, el método de operación, el volumen de elución, etc.。

Análisis de causas comunes:

1. Baño de hielo o centrifugación a baja temperatura (4 ° C) durante el funcionamiento.

Sugerencia: Funcionamiento a temperatura ambiente (15-25 °C), nunca en baño de hielo y centrífuga a baja temperatura.

2. Almacenamiento inadecuado de muestras o almacenamiento de muestras durante demasiado tiempo.

Sugerencia: almacene las muestras a -80 ° C o congele en nitrógeno líquido y evite el uso repetido de congelación y descongelación;trate de usar muestras recién recolectadas para la extracción de ARN.

3.Lisis de muestra insuficiente

Recomendación: asegúrese de que la muestra y la solución de trabajo (acrilamida lineal) se hayan mezclado completamente e incubado durante 10 min a temperatura ambiente (15-25 ° C)

4.El eluyente se agregó incorrectamente

Recomendación: asegúrese de agregar ddH2O sin ARNasa en el centro de la membrana de la columna de purificación

5. Volumen inadecuado de etanol anhidro en Buffer viRW2

Sugerencia: siga las instrucciones, agregue el volumen correcto de etanol anhidro al tampón viRW2 y mézclelos bien antes de usar el kit。

6. Uso inadecuado de la muestra.

Sugerencia: 200 µl de muestra por 500 µl de Buffer viRL.Un volumen de muestra excesivo dará como resultado una tasa de extracción de ARN reducida.

7. Volumen de elución inadecuado o elución incompleta.

Sugerencia: el volumen de eluyente de la columna de purificación es de 30-50 μl;si el efecto de elución no es satisfactorio, se recomienda añadir ddH sin ARNasa precalentado₂O y extender el tiempo de colocación a temperatura ambiente, como 5-10min

8. La columna de purificación tiene residuos de etanol después de enjuagar en Buffer viRW2.

Sugerencia: si todavía queda etanol después de enjuagar en Buffer viRW2 y centrifugar en tubo vacío durante 2 minutos, la columna de purificación se puede dejar a temperatura ambiente durante 5 minutos después de la centrifugación en tubo vacío para eliminar completamente el etanol restante.

La degradación de las moléculas de ARN purificadas

La calidad del ARN purificado está relacionada con factores como el almacenamiento de la muestra, la contaminación por ARNasa y el funcionamiento.

Análisis de causas comunes:

1. Las muestras recolectadas no se guardaron a tiempo.

Sugerencia: si la muestra no se usa a tiempo después de la recolección, guárdela a -80 ℃ o nitrógeno líquido inmediatamente.Para la extracción de moléculas de ARN, intente utilizar muestras recién recolectadas siempre que sea posible.

2. Las muestras recolectadas se congelaron y descongelaron repetidamente.

Sugerencia: evite congelar y descongelar repetidamente (no más de una vez) durante la recolección y el almacenamiento de muestras, de lo contrario, disminuirá el rendimiento de ácido nucleico.

3. Se introdujo ARNasa en quirófano o no se utilizaron guantes desechables, mascarillas, etc.

Sugerencia: el experimento de extracción de moléculas de ARN se realiza mejor en una sala de operaciones de ARN separada, y la mesa experimental se limpia antes del experimento.Use guantes y máscaras desechables durante el experimento para evitar la degradación del ARN causada por la introducción de RNase.

4.El reactivo está contaminado por RNase durante el uso.

Sugerencia: reemplace con el nuevo kit de aislamiento de ARN viral para experimentos relacionados.

5. La contaminación por ARNasa de los tubos de centrífuga, las puntas de pipeta, etc. Sugerencia: asegúrese de que los tubos de centrífuga, las puntas de pipeta y las pipetas estén libres de ARNasa.

Las moléculas de ARN purificadas afectaron los experimentos posteriores.

Las moléculas de ARN purificadas por la columna de purificación afectarán los experimentos posteriores si hay demasiados iones de sal o proteínas, como: transcripción inversa, Northern Blot, etc.。

1. Quedan iones de sal en las moléculas de ARN eluidas.

Recomendación: asegúrese de haber agregado el volumen correcto de etanol anhidro al tampón viRW2 y lave la columna de purificación dos veces de acuerdo con la velocidad de centrifugado correcta en las instrucciones de funcionamiento; si aún quedan iones de sal, puede agregar el tampón viRW2 a la columna de purificación y dejarlo a temperatura ambiente durante 5 minutos.Luego realice la centrifugación para eliminar la contaminación de iones de sal en la mayor medida

2. Hay etanol restante en las moléculas de ARN eluidas

Sugerencia: una vez que confirme que las columnas de purificación han sido enjuagadas por Buffer viRW2, realice una centrifugación en tubo vacío de acuerdo con la velocidad centrífuga en las instrucciones de funcionamiento.Si todavía queda etanol, se puede dejar durante 5 minutos a temperatura ambiente después de una centrifugación en tubo vacío para eliminar el etanol restante en la mayor medida posible.

Manuales de instrucciones:

Manual de instrucciones del kit de aislamiento de ARN viral