La baja proporción de A260/A230 suele deberse a impurezas con una longitud de onda de absorción máxima de 230 nm.Veamos qué incluyen estas impurezas:

• Contaminantes comunes	Longitud de onda de absorción	Efecto de la relación
  Proteína	~230nm y 280nm	Reducción simultánea de A260/A 280y un260/A 280proporciones
  Sal de guanidina	220-240 nanómetro	Reducir la A260/A 280relación
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm y 270nm	Reducir la A260/A 280relación
  EDTA	~230nm	Reducir la A260/A 280relación
  Etanol	230-240 nanómetro	Reducir la A260/A 280relación

 
 
 
Longitud de onda de absorción y valor de contraste de contaminantes comunes

Pcontaminación por proteína
La contaminación por proteínas se puede considerar como la contaminación más común en el proceso de extracción de ácidos nucleicos.La proteína existe entre la fase acuosa superior y la inferior.orgánicofase .La contaminación reducirá la proporción de A260/A280 y A260/A230 al mismo tiempo, y la proporción de A260/A230 cambiará de forma más evidente que la proporción de A260/A280.
Durante posteriorestranscripción inversaor reacciones qPCR, Los residuos de proteínas pueden inhibir o interferir con la función enzimática..La mejor forma de evitar la contaminación con proteínas es tener en cuenta el principio de "más bien menos que más, una pequeña cantidad muchas veces" al aspirar el sobrenadante.

2. Contaminación por guanidinio
El clorhidrato (GuHCl) y el tiocianato de guanidina (GTC) tienen el efecto de desnaturalizar las proteínas, lo que puede destruir rápidamente las membranas celulares durante el proceso de extracción del ácido nucleico, provocando la desnaturalización y la precipitación de las proteínas.La longitud de onda de absorción de GuHCl y GTC está entre 220 y 240 nm, y lala sal de guanidinio residual reducirá la proporción de A260/A230.Aunque la sal de guanidinio residual reducirá la proporción,el impacto en los experimentos posteriores es en realidad insignificante.

3. Contaminación con trizol
El componente principal de Trizol es el fenol.La función principal del fenol es lisar las células y liberar proteínas y sustancias de ácido nucleico en las células.Aunque el fenol puede desnaturalizar eficazmente las proteínas, no puede inhibir por completo la actividad de la RNasa.Por lo tanto, se agregan 8-hidroxiquinolina, isotiocianato de guanidina, β-mercaptoetanol, etc. a TRIzol para inhibir la RNasa endógena y exógena.
Al extraer el ARN celular, Trizol puede lisar rápidamente las células e inhibir la nucleasa liberada de las células, y el Trizol residual reducirá significativamente la proporción de A260/A230.
Método de procesamiento: al centrifugar, debe tenerse en cuenta que el fenol en Trizol es fácilmente soluble en la fase acuosa en condiciones de 4 ° y temperatura ambiente.

4. Residuo de etanol
El etanol se usa en el proceso final para precipitar el ADN mientras se disuelven los iones de sal que pueden estar unidos al ADN.La longitud de onda de absorción de la más altapico de absorción deel etanol también está a 230-240 nm, lo quetambién reducirá la proporción de A260/A230.
El método para evitar residuos de etanol se puede repetir dos veces durante la elución final, soplando en elCampana extractoradurante dos minutos para permitir que el etanol se evapore por completo antes de agregar tampón para elución.
Sin embargo, debe saberse que la proporción es solo un índice de evaluación de la calidad del ARN.Si las operaciones mencionadas anteriormente están estrictamente reguladas, la desviación entre la relación y el rango estándar no tendrá un gran impacto en los experimentos posteriores.
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