Los métodos de PCR y la contaminación por aerosoles de ácidos nucleicos en los laboratorios de análisis de ácidos nucleicos son como las dos caras de una moneda.Solo podemos elegir tenerlo o no, pero no podemos elegir si lo queremos o lo gastamos.

1. Detección de removedor de ADN

Para lograr la eliminación espacial de la contaminación por aerosol de ácido nucleico, primero es necesario descartar los eliminadores de ADN que pueden eliminar los ácidos nucleicos en estado líquido.Porque no hay muchos removedores de ADN que realmente funcionen.Para conocer el método experimental, consulte: ¡El removedor de ADN no puede ser un "rincón secreto" del laboratorio!

En este experimento, se mezclaron en volúmenes iguales 100 copias/μL (CT aproximadamente 31) de plásmido ASFV y removedor de ADN cuantificado por PCR digital y luego se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 10 min, 20 min y 30 min respectivamente.Después de la extracción del ácido nucleico, se llevó a cabo la amplificación por qPCR.Se comparó un control positivo mezclado con plásmido y agua.Dado que el experimento no se completó al mismo tiempo, puede haber una cierta desviación entre los resultados, pero no afecta la conclusión del experimento.Hasta ahora, he evaluado 10 productos comerciales de eliminación de ADN.Solo los productos No. 1, No. 6 y No. 8 pueden degradar efectivamente el ADN plasmídico en estado líquido.Otros productos casi no tienen efecto.

Tabla 1 Efecto de eliminación de ácido nucleico del eliminador de ADN comercialmente disponible

2. El experimento del efecto de eliminación de ADN de los desinfectantes de uso común

1. Detección de desinfectantes de uso común

Hay muchos tipos de desinfectantes comúnmente utilizados en los laboratorios: aldehídos, fenoles, alcoholes, sales de amonio cuaternario, peróxidos, preparados de cloro y ácidos y bases.Los efectos de desinfección de estos desinfectantes sobre los microorganismos se han verificado completamente mediante experimentos, pero no hay suficientes datos experimentales sobre el efecto de degradación de los ácidos nucleicos.Los laboratorios de análisis de ácidos nucleicos necesitan un desinfectante que no solo tenga un buen efecto desinfectante sobre los microorganismos, sino que también pueda degradar el ADN.Los resultados de las pruebas muestran que solo dos preparaciones de cloro de 84 desinfectante y ácido tricloroisocianúrico y ácido clorhídrico 1 M cumplen con los requisitos.Dado que el ácido clorhídrico 1 M es altamente corrosivo, se recomienda que las preparaciones de cloro se utilicen como desechos en los laboratorios de análisis de ácidos nucleicos.Sin embargo, los preparados de cloro son corrosivos para los metales y no se pueden utilizar para la desinfección de instrumentos y equipos.

Tabla 2 Efectos de eliminación de ADN de diferentes tipos de desinfectantes

2. La concentración mínima efectiva de las preparaciones de cloro.

Los desinfectantes a base de cloro tienen un fuerte efecto de degradación del ADN, pero debido a su corrosividad e irritación de los metales, se pueden usar para limpiar el piso, encimeras no metálicas, puntas de remojo, tubos de centrífuga y otros elementos de prueba.

De acuerdo con las "Guías técnicas para la desinfección de epidemias de neumonía coronaria nueva": Contaminantes (sangre, secreciones y vómitos de los pacientes) cloro disponible 5 g/L-10 g/L desinfectante que contiene cloro;Los pisos, las paredes y las superficies de los objetos usan cloro disponible 1 g/L Desinfectante de cloro: la ropa, la ropa de cama y otros textiles se sumergen primero en desinfectante de cloro con 0,5 g/L de cloro disponible durante 30 minutos y luego se limpian como de costumbre.

Tabla 3 Efecto de eliminación de ADN de diferentes concentraciones de cloro desinfectante

Los resultados de la prueba muestran que: cuando la concentración efectiva de cloro es mayor o igual a 1,2 g/L, el desinfectante que contiene cloro puede degradar completamente 100 copias/μL de plásmido cuando se usa durante 5 minutos.Al actuar durante 10 minutos, el desinfectante 84 con una concentración efectiva de cloro mayor o igual a 0,6 g/L puede degradar completamente 100 copias/μL de plásmidos.

3. Experimento de eliminación de aire contaminado por aerosol de ácido nucleico

¿Cómo limpiar el aire contaminado por aerosoles de ácido nucleico?La mayoría de los pensamientos son para crear un ambiente contaminado con aerosoles y luego limpiarlo, o para limpiar los ácidos nucleicos después de la contaminación.Para mí, un experimento que no se puede repetir y los resultados del experimento no se pueden analizar cuantitativamente no tiene sentido, por lo que tomé prestados algunos métodos de desinfección del aire con desinfectante.Consulte "GB27948-2020 Requisitos generales para desinfectantes de aire" y "Especificaciones técnicas de desinfección"

1. Materiales de prueba

1.1 Removedor de ADN: En este experimento, se seleccionaron dos removedores de ADN comercialmente disponibles 6 y 8 en la Tabla 1.

1.2 Plásmido de prueba: considerando que el valor de CT de la mayoría de la contaminación del laboratorio será superior a 30, la concentración del plásmido del gen ASFV utilizado esta vez es de aproximadamente 100 copias/μL, y la PCR CT cuantitativa fluorescente es de aproximadamente 31,07.Agregue el plásmido al hisopo de algodón flocado y seque al aire.

1.3 Instrumento de prueba: El instrumento de desinfección Bilingkehan KVBOX, que cuenta con el amable apoyo de Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., tiene un excelente rendimiento de desinfección del aire con desinfectante de peróxido de hidrógeno y puede eliminar eficazmente las esporas y otros microorganismos.

1.4 Espacio de prueba: una ventana de transferencia cerrada de aproximadamente 0,1 metros cúbicos.

2. Método de prueba

La cantidad de desinfectante establecida en la máquina de desinfección es de 10 ml y la concentración es de 100 ml/m3, que es mucho más alta que los "Requisitos generales GB27948-2020 para desinfectantes de aire": cuando se utiliza desinfección por aerosol, la cantidad de desinfectante debe ser ≤10 ml/m3