Las pruebas de laboratorio comienzan con la recolección de muestras, y la recolección de muestras es la más fácil de pasar por alto.Lo más importante para la recolección de muestras es seleccionar el tipo de muestra correcto, usar las herramientas de muestreo adecuadas y llevar a cabo un transporte y procesamiento razonables.

I.Tipo de muestra

Los tipos de muestras comunes son los siguientes:

El método de muestreo puede referirse a las especificaciones técnicas para el monitoreo ambiental del nuevo coronavirus en el mercado de comercio agrícola (bazar)”:

1. Muestras de hisopos de hisopos de garganta, manos, ropa y otros objetos de los médicos: se requiere usar la solución de conservación de virus en el tubo de muestreo de virus e infiltrar completamente los hisopos de algodón de muestreo.La superficie del suelo) se aplica repetidamente y se enjuaga más de 3 veces.Al mismo tiempo, es necesario realizar un muestreo distribuido multipunto en la superficie del objeto muestreado.

2. Muestras de hisopos de la superficie de los alimentos: las muestras de alimentos no se pueden recolectar directamente.Los alimentos que se recolectarán deben separarse con cuidado y almacenarse en una bolsa de muestreo limpia antes de recolectar muestras de hisopo.Se requiere usar la solución de conservación de virus en el tubo de muestreo de virus, después de empapar completamente el hisopo de algodón de muestreo, para frotar y enjuagar repetidamente la superficie de la muestra de alimentos que se recolectará más de 3 veces.Al mismo tiempo, es necesario realizar un muestreo distribuido multipunto en la superficie de la muestra.

3. Muestras de aguas residuales: de acuerdo con la distribución del sistema de drenaje en el mercado, seleccione 2-3 ubicaciones de muestreo de aguas residuales, centrándose en la recolección de la red de tuberías interna, aguas abajo de la dirección del flujo de agua o la conexión con la red de tuberías municipal.Para recolectar una muestra de hisopo, sumérjala en las aguas residuales con un hisopo de algodón de muestreo para que absorba las aguas residuales y enjuáguelo en el tubo de muestreo más de 3 veces.Para recolectar muestras de aguas residuales, use botellas de plástico de polietileno para recolectar muestras de aguas residuales de 30-500 mL;para la recolección de aguas residuales con un volumen superior a 500 ml, se pueden utilizar baldes de plástico de polietileno o equipos especiales de enriquecimiento de muestras de agua en el sitio.Al mismo tiempo, es necesario realizar un muestreo distribuido multipunto para el lugar de muestreo de aguas residuales.

4. Muestras de animales: para animales vivos, los hisopos de muestreo se pueden usar para recolectar hisopos de la superficie corporal, hisopos orofaríngeos y hisopos anales, y también se pueden recolectar muestras de excrementos o secreciones y registrarlas en la hoja de registro.Para las muestras de animales que han sido desolladas, etc., use hisopos de algodón para recolectar muestras de hisopos de la superficie corporal y de la cavidad corporal.Se requiere usar la solución de conservación de virus en el tubo de muestreo de virus para infiltrar completamente el hisopo de algodón de muestreo y luego repetir la aplicación de la superficie de la muestra de alimentos que se va a recolectar.Shabu más de 3 veces.Al mismo tiempo, es necesario realizar un muestreo distribuido multipunto en la superficie de la muestra.

5. Otros aparatos: contenedores para transporte y cría de animales como jaulas o peceras.Primero, observe o comprenda los tipos específicos de animales almacenados y criados en el contenedor, y recolecte muestras de hisopos en la pared interna del contenedor o muestras líquidas del contenido.

6.Recolectar muestras de aerosol en áreas donde se reúna la gente, áreas comerciales, oficinas y baños locales mal ventilados.

II.Herramientas de muestreo
1. Tubo de extracción de sangre
Si necesita realizar pruebas de ácido nucleico y muestras de anticoagulantes más adelante, se recomienda utilizar un vaso sanguíneo al vacío que contenga anticoagulante EDTA para recolectar sangre;para muestras de suero, se recomienda utilizar un vaso sanguíneo de vacío sin anticoagulante.

2. Hisopo de muestreo

Se recomienda utilizar hisopos de polipropileno en lugar de hisopos de alginato de calcio o hisopos con palos de madera, ya que pueden contener sustancias que inactivan ciertos virus e inhiben las pruebas de PCR.No se pueden usar hisopos con cabezas de algodón, porque las fibras de algodón tienen una fuerte adsorción de proteínas y no se eluyen fácilmente en la solución de conservación posterior.

En las “Especificaciones técnicas para la recolección y detección mixtas 10 en 1 de nuevos ácidos nucleicos de coronavirus”, se estipula claramente que “el hisopo de muestreo debe estar hecho de poliéster, nailon y otros materiales que no sean algodón ni alginato de calcio, y el mango debe estar hecho de material que no sea madera.El punto de ruptura está a unos 3 cm de la parte superior de la cabeza del hisopo, que es fácil de romper”.

El CDC en los Estados Unidos también mencionó “Use solo hisopos de fibra sintética con mangos de plástico o alambre.No utilice hisopos de alginato de calcio o hisopos con mangos de madera,ya que pueden contener sustancias que inactivan algunos virus e inhiben las pruebas de PCR.

Actualmente se usa ampliamente un hisopo de flocado de nailon estéril desechable combinado con una varilla de plástico.El hisopo de flocado tiene una mejor tasa de absorción y liberación de agua.Según los diferentes sitios de muestreo, la cabeza del hisopo también tiene diferentes tamaños y fibras.El grosor.”

3. Solución de conservación de transporte de muestra

Solución de conservación de inactivación de virus: una cantidad adecuada de concentración de sal de guanidina y una variedad de componentes de lisis de virus pueden lisar directamente el virus para liberar ácido nucleico, inactivar RNasa y DNasa, y garantizar la integridad del ácido nucleico, que puede usarse para la posterior detección de qPCR.No se puede utilizar para el cultivo y aislamiento de virus.

Solución de transporte y conservación de virus: contiene sales, aminoácidos, vitaminas, glucosa y proteínas necesarias para la supervivencia del virus, que pueden mantener la actividad del virus.Se puede usar para la extracción de ácido nucleico y la detección del virus en el futuro, y también se puede usar para el cultivo y la separación del virus.

4. Tubo de conservación de muestras y bolsa de muestras

El tubo de almacenamiento de la muestra debe ser un tubo de plástico estéril con un tapón de rosca que no adsorba el ácido nucleico.Cada tubo de muestra debe cubrirse con una bolsa de muestra para evitar fugas y contaminación de la muestra.

tercero.Sustancias que interfieren en la muestra

Sustancias que interfieren en experimentos de PCR

1. interferente endógeno

Las sustancias presentes en la muestra corporal pueden interferir con la detección de otras sustancias.

Sangre:hemo (>1mg/ml), hemina (>0,1ng/μl), triglicéridos, IgG, etc.;

Orina:urea (20 mM);

Heces:polisacáridos vegetales, colato;

Tejido:proteasa, colágeno;

Leche: proteasa, ion calcio;

drogas: antibióticos, medicamentos antivirales, hormonas, etc.

otro.

2. interferencia exógena

Proviene de sustancias que pueden interferir en la detección de otras sustancias in vitro.Muestras de aditivos y sustancias que pueden entrar en contacto durante la recolección y el procesamiento de muestras:

Suministros de prueba: gel de separación de suero, recipiente de recogida de muestras y tapón de goma, catéter, líquido de lavado de catéter, polvo para guantes, etc.

Anticoagulante: heparina (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), etc.;

Disolventes orgánicos: isopropanol (>0,1 UI/ml), betaína, dimetilsulfóxido, formamida, glicerina, PEG, etc.;

Desinfectantes: alcoholes (etanol>1%), aldehídos, fenoles (fenol>0,2%), peróxidos, ácidos fuertes (HCL), álcalis fuertes (NaOH), etc.;

Detergente:SDS (>0,005%);

Suelo: Humus

Colorante: Índigo

otro.

En condiciones reales de muestreo al aire libre, como la recolección de muestras ambientales, las muestras pueden contener una variedad de sustancias que interfieren, y la composición de las sustancias que interfieren en cada ubicación es diferente, lo que requiere que se realicen experimentos de interferencia de PCR de acuerdo con las condiciones locales.

IV.Ejemplo de condiciones de almacenamiento y transporte.

Las muestras clínicas recién recolectadas deben enviarse al laboratorio dentro de las 2 a 4 horas posteriores a la recolección a una temperatura de 2 °C a 8 °C.Almacene a 4 ℃ dentro de las 24 horas.Las muestras utilizadas para el aislamiento del virus y la detección de ácidos nucleicos deben analizarse lo antes posible.Las muestras que se pueden analizar en 24 horas se pueden almacenar a 4 °C;las muestras que no se puedan detectar dentro de las 24 horas deben almacenarse a -70 °C o menos (si no- Almacenar a 70 °C en un refrigerador a -20 °C).

Resumen:La recolección, el transporte y el almacenamiento estandarizados de muestras son esenciales para las pruebas posteriores.Los falsos negativos de muchas pruebas de laboratorio son causados ​​por la recolección, el transporte y el almacenamiento inadecuados de las muestras que conducen a la degradación del ácido nucleico viral.Sin embargo, muchos laboratorios aún ignoran la importancia del muestreo.¡Espero que este artículo pueda despertar la atención de todos sobre el muestreo y hacer un muestreo más científico y razonable!

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