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Acerca de Nextracción de ácido ucleico

El principio y el final del ácido nucleico purificado.

Todo es difícil al principio, el ácido nucleico purificado es lo más

Iniciación de experimentos moleculares, para experimentos posteriores

El éxito o el fracaso tiene un impacto crucial.

Muchos investigadores científicos prefieren el espectrofotómetro UV de trazas/ultratrazas porque puede detectar la concentración de ácido nucleico y los residuos de iones de proteínas y sales de manera simple, rápida y económica.

Como todos sabemos, A260 significa valor de OD de absorbancia de ácido nucleico, A280 significa valor de OD de absorbancia de concentración de proteína, A230 significa valor de OD de absorbancia de concentración de iones de sal, por lo que A260 puede convertir la concentración de ácido nucleico, A260/280 significa residuo de proteína, A260/230 significa residuo de ion de sal, pero esta es solo una regla descubierta por investigadores basada en una gran cantidad de resultados de medición, y es "convencional” para creer que puede explicar la pureza del ADN y el ARN aen cierta medida.No es el único estándar para la identificación del rendimiento y la pureza del ácido nucleico, solo se usa como referencia y no es un "estándar de oro".

El manual de Thermo Fisher ND-2000 destaca la fiabilidad de los resultados de las pruebas

La razón es que los resultados obtenidos mediante el uso de un espectrofotómetro UV micro/ultramicro solo reflejan el rendimiento y la pureza del ácido nucleico desde un lado, y hay muchos factores que influyen (ruta óptica, volumen de muestra, concentración de muestra, valor de pH, otros iones que afectan la medición de absorbancia, etc.), el valor de OD medido no es necesariamente preciso.Al mismo tiempo, debido a la falta de especificidad del material de determinación del valor de absorbancia, el ADN monocatenario, el ADN bicatenario, el ARN, los dNTP y algunas proteínas tienen picos de absorción a una longitud de onda de 260 nm, y la concentración determinada por A260 solo no es necesariamente el ADN o ARN real.La concentración y su integridad y degradación no pueden ser juzgadas.

Entonces, ¿cómo juzgar la calidad de nuestro ácido nucleico purificado?Además de usar un espectrofotómetro UV micro/ultramicro para la detección, también se requieren métodos como la electroforesis en gel de agarosa para mostrar visualmente la pureza e integridad del ácido nucleico, y para indicar la concentración hasta cierto punto.De esta manera, el rendimiento y la pureza del ácido nucleico obtenidos a partir de los resultados de detección de varios métodos son creíbles.

Comparación de gráficos experimentales

El ADN genómico de las células H1299 se extrajo con los kits de extracción de ADN de la empresa A y se observó una contaminación significativa por impurezas, lo que dio como resultado valores altos de DO

(Valor de medición de OD y electroferograma correspondiente)

Índice de evaluación

¿Existe un “estándar de oro” para las pruebas de rendimiento y calidad de los ácidos nucleicos?

Hasta donde sabemos, no existe un método simple, rápido y barato.Ya sea un espectrofotómetro, una electroforesis en gel o una espectrometría de masas, todos reflejan la concentración y la pureza del ácido nucleico en la solución desde diferentes aspectos, y deben juzgarse refiriéndose entre sí.

El mejor índice de evaluación es siemprela aplicación experimental de seguimiento.No afecta la eficiencia de la transcripción inversa y la amplificación por PCR.La obtención de productos de amplificación y valores de Ct fiables, y la obtención de una secuencia completa mediante secuenciación es una extracción de ácido nucleico satisfactoria.

En resumen, el punto de vista de la teoría de la relación solamente debe ser cuestionado por el punto de vista de “utilizar buenos resultados experimentales posteriores como buenos parámetros de extracción”.

Kits de extracción de ADN y ARN de Foregene recomendados para obtener una alta pureza de ADN/ARN:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/