1: reemplace los suministros experimentales a tiempo

Configure el control negativo (NTC) y repítalo muchas veces.Una vez que se encuentre que hay contaminación del producto PCR en el laboratorio, reemplace todos los suministros experimentales a tiempo.Tales como: volver a diluir y preparar los cebadores, volver a esterilizar la punta de la pipeta, el tubo EP, ddH2O, etc., reemplazar con una nueva pipeta y tomar prestados temporalmente otros laboratorios para realizar experimentos de PCR.El laboratorio contaminado será ventilado e irradiado con rayos ultravioleta hasta eliminar la contaminación del producto PCR antes de proceder con el experimento.

2: extender el tiempo de exposición a los rayos UV

Vale la pena señalar que para eliminar la contaminación del ADN, la radiación ultravioleta regular debe extenderse 2 horas más de lo habitual.Aun así, el efecto de la radiación UV en la eliminación de pequeños fragmentos (por debajo de 200 pb) de la contaminación del ADN todavía no es bueno.

La longitud de onda ultravioleta (nm) es generalmente 254/300nm y es suficiente para irradiar durante 30 minutos.Cabe señalar que al elegir UV para eliminar la contaminación de productos de PCR residuales, se debe considerar la longitud del producto de PCR y la distribución de bases en la secuencia del producto.La radiación UV solo es efectiva para fragmentos largos por encima de 500 pb y tiene poco efecto en fragmentos cortos.

Durante la irradiación UV, las bases de pirimidina en el producto de PCR formarán dímeros.Estos dímeros pueden terminar la extensión, pero no todas las pirimidinas en la cadena de ADN pueden formar dímeros y la radiación UV también puede romper los dímeros..El grado de formación del dímero depende de la longitud de onda UV, el tipo de dímero de pirimidina y la secuencia de nucleótidos adyacentes al sitio del dímero.Por lo tanto, si los fragmentos amplificados por PCR son pequeños, se recomienda utilizar el sistema de contaminación del producto anti-PCR UNG.

3: Eliminadores de contaminación de ADN de uso común

Los aerosoles se generan fácilmente cuando se agregan pipetas, lo cual es difícil de evitar y se asentará rápidamente.Por lo tanto, sin duda es una buena opción usar con frecuencia eliminadores de contaminación de ADN especiales para evitar la propagación de la contaminación de ADN.

4: utilice el sistema anticontaminación UNG

Una vez eliminada la contaminación del producto PCR, el laboratorio de pruebas puede utilizar el sistema de contaminación del producto anti-PCR UNG para evitar la contaminación del producto PCR.En los laboratorios generales, puede realizar particiones experimentales simples, separar estrictamente el área del producto de PCR de otras áreas, establecer ciertas reglas y regulaciones de laboratorio y realizar la capacitación pertinente para evitar la contaminación del producto de PCR.

Recomendaciones: establecer un laboratorio de PCR razonable, mantener un buen entorno de PCR, formular procedimientos operativos estándar de PCR y cultivar la conciencia operativa rigurosa de los experimentadores son las claves para prevenir o reducir la contaminación de los experimentos de PCR.