W: Hermano, se completó la transcripción inversa y, finalmente, el último paso: ¡PCR cuantitativa fluorescente!Oye, hermano, ¿qué es la PCR cuantitativa en tiempo real?
M: PCR siempre lo sabes, ¿verdad?
W: ¡Sabes, la PCR es la reacción en cadena de la polimerasa, y es una tecnología que aumenta el ADN!
M:Es casi... Es un método técnico para amplificar la secuencia objetivo a más de un millón de veces a través de cebadores específicos, pero esto solo indica la presencia o ausencia de la secuencia objetivo, y no puede determinar la cantidad de la plantilla inicial.La PCR cuantitativa de fluorescencia es un método técnico desarrollado para resolver este problema.La PCR en tiempo real y la PCR cuantitativa (qPCR) generalmente se refieren a ella.
W: ¿La diferencia con la PCR ordinaria radica en la cuantificación de la fluorescencia?
M: Sí, es decir, en la etapa de extensión de cada ciclo de PCR, se detecta la intensidad de la señal de fluorescencia y se puede calcular la cantidad de plantilla inicial de acuerdo con el cambio de la intensidad de la señal.
W: ¡Se siente tan complicado!¿Tengo que calcular esto por mí mismo?
M: Esto requiere que aprendas lentamente, lo mejor es ser capaz de entender el principio.Ahora puede centrarse primero en el valor de CT, que son datos experimentales relativamente intuitivos, y su tamaño corresponde al tamaño de la cantidad de plantilla inicial.También hay gráficos como curvas de amplificación y curvas de fusión.Ellos tienen la última palabra sobre si su experimento tiene éxito o no.
W: Oh, hermano.¡Entonces voy a hacer el experimento qPCR!
M: ¡Preste especial atención a no agregar plantillas en el área de reactivos, de lo contrario, su mezcla sin usar se contaminará fácilmente!
W: ¡Entendido!

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