El siguiente análisis de posibles problemas enBucaltorunda/TLC card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

La columna de purificación está obstruida.

En este kit, en la operación de extracción de ADN genómico, la columna de purificación se adsorbe directamente en la mezcla de lisis enzimática de la muestra sin el paso de centrifugación, y la columna de purificación puede bloquearse debido a una enzimación incompleta y una alta viscosidad de la muestra.

Las siguientes posibles causas son las siguientes:

1. Digestión enzimática incompleta de muestras de tejido.

Recomendación: El tiempo de procesamiento de la muestra de Foregene Protease se puede extender adecuadamente o se puede tomar el sobrenadante después de la centrifugación a 12 000 rpm (~13 400× g) durante 5 min.

2. Uso excesivo de muestras de tejido o tejidos grandes.

Recomendación: Lo mejor es no pasar de 1Bucal hisopo en la muestra;si la muestra es demasiado grande, aumente la dosis de tampón ST1, Foregene Protease, tampón ST2 en consecuencia.

3. La viscosidad de la muestra es demasiado alta.

Recomendación: las muestras se pueden diluir adecuadamente con 10 mM de Tris-HCl antes de la extracción de ADN genómico.

4. Se han succionado fragmentos de la tarjeta de sangre.

Recomendación: El tiempo de centrifugación transitoria del paso 6 de la extracción genómica de la mancha de sangre (tarjeta FTA) puede extenderse adecuadamente.

Bajo rendimiento o sin ADN

A menudo, hay una variedad de factores que afectan el rendimiento del ADN genómico, incluido el origen de la muestra, las condiciones de almacenamiento de la muestra, la preparación de la muestra, la manipulación, etc.

El ADN genómico no se puede obtener durante la extracción.

Las posibles causas son las siguientes:

1. La conservación inadecuada de las muestras o el almacenamiento durante demasiado tiempo conduce a la degradación del ADN genómico.

Recomendación: Los hisopos orales preferiblemente deben ser muestreados recientemente, y no es recomendable utilizar hisopos preservados para operaciones de extracción de ADN genómico;las muestras de gotas de sangre deben garantizar que la calidad sea calificada y el tiempo de almacenamiento no debe ser demasiado largo.

2. Es posible que el uso de demasiado poco tejido no produzca la extracción del ADN genómico correspondiente.

Recomendación: Siga lasbocal Instrucciones de muestreo de hisopo en la guía de operación, y limpie tantas veces como sea posible para que se puedan unir suficientes células al hisopo oral para la extracción de ADN genómico;para la extracción de muestras de gotas de sangre, el área de corte de las gotas de sangre se puede aumentar adecuadamente.

3. Foregene Protease no se conserva correctamente, lo que provoca una disminución de su actividad o inactivación.

Recomendación: Confirmar las condiciones de almacenamiento dela Foregene Protease o reemplácelo con una nueva Foregene Protease para la reacción enzimática.

4. La conservación inadecuada del kit o el tiempo de almacenamiento es demasiado largo, lo que provoca la falla de algunos componentes del kit.

Recomendación: compre una nuevaBucal hisopo de ADNaislamiento kit para procedimientos relacionados.

5. El tampón WB no agrega etanol absoluto.

Recomendación: Confirme que el tampón WB agrega el volumen correcto de etanol absoluto.

6. El eluyente no se agrega correctamente a la película de silicona.

Recomendación: Añadir 65ºCel eluyente precalentado cae al centro de la membrana de silicona y se deja a temperatura ambiente durante 5 min para aumentar la eficacia de elución.

LADN genómico de bajo rendimiento aislado

Las siguientes posibles causas son las siguientes:

1. La conservación inadecuada de las muestras o el almacenamiento durante demasiado tiempo conduce a la degradación del ADN genómico.

Recomendación: Los hisopos orales se toman preferiblemente como muestras frescas y los hisopos conservados no deben usarse para la extracción de ADN genómico.

2. Si la cantidad de muestra de tejido es demasiado pequeña, el contenido de ADN genómico extraído será menor.

Recomendación: siga las instrucciones para la toma de muestras de hisopos orales de la guía de funcionamiento, limpiando tantas veces como sea posible para que se puedan unir suficientes células al hisopo oral para la extracción de ADN genómico.

3. Foregene Protease no se conserva correctamente, lo que provoca una disminución de su actividad o inactivación.

Recomendación: Confirmar las condiciones de almacenamiento dethe Foregene Protease o reemplácela con una nueva Foregene Protease para reacción enzimática.

4. Problemas de eluyentes.

Recomendación: Utilice Buffer EB para elución;si usa ddH₂O u otros eluyentes, confirme que el pH del eluido está entre 7,0 y 8,5.

5. El eluato no se agrega gota a gota correctamente.

Recomendación: Añadir gotas de eluyente en el centro de la membrana de silicona y dejar a temperatura ambiente durante 5 min para aumentar la eficacia de elución.

6. El líquido de elución se acumula muy poco.

Recomendación: Use eluyente para la elución de ADN genómico como se requiere en las instrucciones, al menosno menos de 15μl.

Luy pureza of ADN genómicoaislado

La baja pureza del ADN genómico puede conducir al fracaso o a resultados insatisfactorios de los experimentos posteriores, como: las enzimas no se pueden cortar, la PCR no puede obtener el fragmento de gen de interés, etc.

Las posibles causas son las siguientes:

1. Contaminación por heteroproteínas, contaminación por ARN.

Análisis: La columna de purificación no se lavó con Buffer PW;la columna de purificación de lavado Buffer PW no se lavó utilizando la velocidad centrífuga correcta.

Recomendación: Asegúrese de que no haya precipitación en el sobrenadante antes de agregar etanol;asegúrese de lavar la columna de purificación de acuerdo con las instrucciones, y este paso no se puede omitir.

2. Contaminación por iones de impurezas.

Análisis: La columna de purificación de lavado con tampón WB se omitió o se lavó solo una vez, lo que resultó en una contaminación iónica residual.

Recomendación: asegúrese de lavar el Buffer WB 2 veces según las instrucciones para eliminar los iones residuales tanto como sea posible.

3. Contaminación de enzimas de ARN.

Análisis: Se añadieron RNasas foráneas al tampón;La operación de lavado de tampón PW fue incorrecta, lo que resultó en residuos de ARNasa, lo que afectó las operaciones experimentales de ARN posteriores, como la transcripción in vitro.

Recomendación: ácido nucleico de la serie ForegeneislaLos kits de ción pueden eliminar el ARN sin la adición adicional de RNase,de este modo Kit de aislamiento de ADN con hisopo bucal/tarjeta FTAnecesario't añadir ARNasa;asegúrese de seguir las instrucciones para la columna de purificación de lavado Buffer PW, y este paso no se puede omitir.

4. Residuo de etanol.

Análisis: Buffer WB no realizó centrifugación en tubo vacío después de lavar la columna de purificación.

Recomendación: Realice la operación correcta de centrifugado en tubo vacío de acuerdo con las instrucciones.

5. Otra contaminación de impurezas.

Análisis: Las muestras guardadas o muestras especiales no se tratan previamente.

Recomendación: Pretrate minuciosamente la muestra según las instrucciones.