Guía de análisis de problemas

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Bajo rendimiento o sin ADN

Por lo general, hay muchos factores que afectan el rendimiento del ADN genómico, incluido el origen de la muestra, la edad de la muestra, las condiciones de almacenamiento de la muestra y la operación.

No se pudo obtener ADN genómico durante la extracción

1. Las muestras de tejido se almacenan incorrectamente o se almacenan durante demasiado tiempo, lo que provoca la degradación del ADN genómico.

Recomendación: almacenar muestras de tejido en nitrógeno líquido o -20°C;intente usar muestras recién recolectadas para la extracción de ADN genómico.

2. Una cantidad de muestra demasiado pequeña puede provocar que no se extraiga el ADN genómico correspondiente.

Sugerencia: para las muestras de tejido que se han almacenado durante mucho tiempo o que tienen una degradación grave del ADN genómico, la cantidad de muestras de tejido se puede aumentar adecuadamente para extraer una cantidad considerable de ADN genómico.La cantidad de la muestra se puede determinar de acuerdo con las necesidades de ADN, pero la muestra fresca no debe exceder los 100 mg y la muestra seca no debe exceder los 30 mg.

3. La muestra no se muele con nitrógeno líquido ni se coloca demasiado tiempo después del nitrógeno líquido.

Sugerencia: durante la extracción de ADN, la muestra debe molerse completamente con nitrógeno líquido para romper la pared celular;después de moler, transfiera el polvo de muestra a PL1 precalentado a 65°C lo antes posible (una vez que se derrita el polvo molido, el ADN genómico comenzará a degradarse rápidamente) .

4. El almacenamiento inadecuado de Foregene Protease da como resultado una actividad reducida o inactivada.

Recomendación: Confirme las condiciones de almacenamiento de Foregene Protease o reemplácela con una nueva Foregene Protease para hidrólisis enzimática.

5. El kit se almacenó incorrectamente o durante demasiado tiempo, lo que provocó que fallaran algunos componentes del kit.

Recomendación: Compre un nuevo kit de extracción de ADN genómico de plantas para operaciones relacionadas.

6. Uso inadecuado del kit.

Sugerencia: compre un kit de aislamiento de ADN vegetal dedicado a muestras para la extracción y purificación de ADN genómico vegetal.

7. Buffer WB sin agregar unnhidro etanol.

Recomendación: asegúrese de agregar el volumen correcto de etanol absoluto a Buffer WB.

8. El eluyente no se goteó correctamente sobre la membrana de sílice.

Sugerencia: Añadir el eluyente precalentado a 65℃gota a gota hasta el centro de la membrana de gel de sílice y déjelo a temperatura ambiente durante 5 minutos para aumentar la eficacia de elución.

Extracción para obtener ADN genómico de bajo rendimiento

1. La muestra se almacenó incorrectamente o se almacenó durante demasiado tiempo, lo que da como resultado la degradación del ADN genómico.

Recomendación: almacenar muestras de tejido a -20℃;intente usar muestras de tejido recién recolectadas para la extracción de ADN genómico.

2. Si la cantidad de muestras de tejido es demasiado pequeña, el ADN genómico extraído será menor.

Sugerencia: algunas muestras de plantas son ricas en agua, como plantas acuáticas como algas, etc., la dosis se puede aumentar adecuadamente o el agua se puede deshidratar un poco antes de la operación.

3. Las muestras no se molieron completamente con nitrógeno líquido o se dejaron a temperatura ambiente durante demasiado tiempo después de la molienda.

Sugerencia: la molienda de nitrógeno líquido debe ser suficiente y la pared de la celda de muestra debe romperse tanto como sea posible;inmediatamente después de la molienda, el polvo de muestra debe transferirse a 65℃Buffer PL1 precalentado para el siguiente paso.

4. No usar el kit correcto.

Recomendación: utilice un kit de aislamiento de ADN vegetal específico para extraer y purificar el ADN genómico vegetal.

5. El almacenamiento inadecuado de Foregene Protease da como resultado una actividad reducida o inactivada.

Recomendación: Confirme las condiciones de almacenamiento de Foregene Protease o reemplácela con una nueva Foregene Protease para hidrólisis enzimática.

6. Problema del eluyente

Recomendación: Utilice Buffer EB para elución;si usa ddH₂O u otros eluyentes, asegúrese de que el pH del eluyente esté entre 7,0 y 8,5.

7. El eluyente no gotea correctamente

Sugerencia: agregue la gota de elución en el medio de la membrana de sílice y déjela a temperatura ambiente durante 5 minutos para aumentar la eficiencia de elución.

8. El volumen de eluyente es demasiado pequeño

Sugerencia: utilice el eluyente para la elución de ADN genómico de acuerdo con las instrucciones, al menos no menos de 100l.

ADN genómico extraído con baja pureza

La baja pureza del ADN genómico conducirá al fracaso o al efecto deficiente de los experimentos posteriores, como: la enzima no se puede cortar y el fragmento del gen objetivo no se puede obtener mediante PCR.

1. Contaminación miscelánea de proteínas, contaminación por ARN.

Análisis: No se usó tampón PW para lavar la columna;No se usó tampón PW para lavar la columna a la velocidad de centrifugación correcta.

Sugerencia: intente asegurarse de que no haya precipitación en el sobrenadante cuando el sobrenadante pase a través de la columna;asegúrese de lavar la columna de purificación con Buffer PW de acuerdo con las instrucciones, y este paso no se puede omitir.

2. Contaminación por iones de impurezas.

Análisis: La columna de lavado Buffer WB se omitió o solo se lavó una vez, lo que resultó en una contaminación iónica residual.

Recomendación: asegúrese de lavar dos veces con Buffer WB de acuerdo con las instrucciones para eliminar los iones residuales tanto como sea posible.

3. Contaminación por ARNasa.

Análisis: se añade RNasa exógena al tampón;una operación de lavado incorrecta en Buffer PW dará como resultado una RNasa residual y afectará las operaciones experimentales de ARN posteriores, como la transcripción in vitro.

Sugerencia: los kits de extracción de ácido nucleico de la serie Foregene pueden eliminar el ARN sin ARNasa adicional, y todos los reactivos del kit de aislamiento de ADN vegetal no necesitan ARNasa;asegúrese de lavar la columna de purificación con Buffer PW de acuerdo con las instrucciones, y este paso no se puede omitir.

4. Residuos de etanol.

Análisis: Después de lavar la columna de purificación con Buffer WB, no se realizó centrifugación en tubo vacío.

Recomendación: Siga las instrucciones para una centrifugación adecuada en tubo vacío.

Manual de instrucciones:

Manual de instrucciones del kit de aislamiento de ADN vegetal