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ARN no codificante largo, lncRNA es un ARN no codificante con una longitud superior a 200 nucleótidos, generalmente entre 200-100000 nt.El lncRNA regula la expresión génica a nivel epigenético, de transcripción y postranscripcional, y participa en el silenciamiento del cromosoma X, la impresión del genoma y la modificación de la cromatina, la activación de la transcripción, la interferencia de la transcripción, el transporte nuclear, la regulación del ciclo celular, la regulación de la diferenciación celular y los efectos de compensación de dosis (efecto de compensación de dosis) y muchos otros procesos de regulación importantes están estrechamente relacionados con la aparición, el desarrollo y la prevención de enfermedades humanas, y actualmente son uno de los puntos calientes en el campo de la biomedicina.

01  Tipos y características de LncRNA

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El lncRNA se divide en muchos tipos según las diferentes fuentes de su formación, como se muestra en la figura anterior.Tiene las siguientes características:

1. Los lncRNA suelen ser más largos, con expresión dinámica y diferentes métodos de corte y empalme durante la diferenciación
2. En comparación con los genes codificadores, el lncRNA suele tener un nivel de expresión más bajo
3. La mayoría de los lncRNA tienen una especificidad de expresión temporal y espacial obvia en el proceso de diferenciación y desarrollo de tejidos.
4. Hay expresiones características en tumores y otras enfermedades
5. Las ubicaciones subcelulares de lncRNA son diversas
6. La secuencia es baja en conservación, pero la función tiene cierto grado de conservación, etc.

02 Preguntas frecuentes sobre la transcripción inversa de LncRNA

Debido al bajo contenido de lncRNA en las células, la longitud larga y la estructura de alto nivel, dicho ARN a menudo tiene estructuras complejas como bucles de tallo u horquillas, y la RT-qPCR es propensa a problemas de transcripción inversa fallida o baja eficiencia.

03 Solución de transcripción inversa LncRNA

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En la regla central, el proceso de los virus de ARN que utilizan su propia transcriptasa inversa para sintetizar ADN utilizando ARN como plantilla se denomina transcripción inversa.El proceso de utilizar transcriptasa inversa de virus de ARN para sintetizar moldes de ADNc in vitro se denomina transcripción inversa.Los principales elementos incluidos en el sistema de transcripción inversa: plantilla de ARN, transcriptasa inversa, cebadores y otros componentes.

1. Plantilla de ARN

La influencia de la plantilla de ARN en la transcripción inversa se refleja en su estructura, pureza e integridad.Cuanto mayor sea la pureza y la integridad del ARN extraído, mayor será la eficiencia de la transcripción inversa y más precisos los resultados cuantitativos posteriores.El ARN purificado por los reactivos de extracción de ARN de uso común a menudo contiene residuos de alcohol y sales de guanidina, que tienen un fuerte efecto inhibidor en la mayoría de las transcriptasas inversas.

2. transcriptasa inversa

La transcriptasa inversa tiene una influencia clave en todo el sistema de transcripción inversa.La temperatura adecuada para la transcriptasa inversa utilizada en la mayoría de los laboratorios es generalmente de 42°C.De hecho, la apertura de la estructura de ARN de alto nivel requiere una temperatura más alta y los requisitos para la transcriptasa inversa son más altos.

3.Cebador

Los cebadores de transcripción inversa incluyen cebadores específicos de genes, cebadores aleatorios y cebadores Oligo dT.La mayoría de los lncRNA no contienen colas poliA y es importante hacer coincidir correctamente los cebadores aleatorios con Oligo dT.

4.Otros componentes

En vista del hecho de que el ARN es particularmente fácil de degradar, se puede minimizar la introducción de componentes en el sistema de transcripción inversa, lo que puede prevenir eficazmente la entrada de RNasa y garantizar el progreso sin problemas de la transcripción inversa.

Foregenese obtiene de la plantilla de ARN, transcripción inversa a qPCR

Acompañe integralmente su detección de lncRNA

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ARN total animal IsoledadKit (con columna de eliminación de gDNA)

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ARN total celular IsoledadKit (con columna de eliminación de gDNA)

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Lnc-RT HeroTM I (con gDNase)(Super Premix para la síntesis de cDNA de primera cadena a partir de lncRNA)

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PCR en tiempo real EasyTM-SYBR Green I

Aventajas ofExtracción de ARN:

El kit utiliza la tecnología de extracción de ARN de tercera generación, sin necesidad de utilizar ADNasa.

11 minutos a partir de células cultivadas en placas de 96, 24, 12 y 6 pocillos, extracción de alta eficiencia de ARN celular total de alta calidad, alta pureza y libre de gDNA.

Ventajas de la transcripción inversa de lncRNA:

Un sistema de transcripción inversa especialmente desarrollado para LncRNA para eliminar rápidamente la contaminación del ADN genómico.

El sistema de transcripción inversa tiene una alta estabilidad térmica y todavía tiene un buen rendimiento de transcripción inversa a 50°C.

Las plantillas con un alto contenido de GC y una estructura secundaria compleja se pueden invertir con gran eficacia.

Ventajasof qRCP:

Hot start Foregene Taq Polymerase tiene una mayor eficiencia de amplificación, una mayor sensibilidad de amplificación y una mayor especificidad de amplificación

El Real PCR Easy Mix optimizado hace que SYBR Green I tenga una mayor sensibilidad de detección, y su intensidad de fluorescencia es de 3 a 5 veces mayor que la de productos similares, lo que puede satisfacer las necesidades de diferentes tipos de experimentos cuantitativos de fluorescencia.


Hora de publicación: 23-jul-2021