Sistema SOP de construcción

Establezca SOP de experimentos de PCR para estandarizar el comportamiento del personal del experimento.

Los experimentadores cumplen estrictamente con los procedimientos operativos y minimizan la contaminación de PCR que puede ser causada por factores humanos o previenen la ocurrencia de contaminación en la operación.Además, el experimentador debe tener los conocimientos y habilidades profesionales correspondientes, incluida la competencia en la operación de equipos relacionados, la clarificación de todo el proceso de trabajo, el dominio de los métodos de tratamiento de la contaminación y los métodos de control de calidad del laboratorio, y la capacidad de interpretar correctamente los resultados de la prueba.

Laboratorio de PCR estándar de construcción

El laboratorio de PCR se divide en principio en cuatro áreas, a saber, el área de preparación de reactivos, el área de procesamiento de muestras, el área de amplificación y el área de análisis de productos de amplificación.Las dos primeras áreas son áreas de preamplificación y las dos últimas áreas son áreas de postamplificación.La zona de preamplificación y la zona de postamplificación deben estar estrictamente separadas.Los materiales experimentales, reactivos, papel de registro, bolígrafos, materiales de limpieza, etc. solo pueden fluir desde el área de preamplificación hacia el área de posamplificación, es decir, desde el área de preparación de reactivos, el área de procesamiento de muestras, el área de amplificación y el área de análisis del producto de amplificación, y no deben fluir en la dirección inversa.El flujo de aire en el laboratorio también debe fluir desde el área de preamplificación hacia el área de postamplificación, no en dirección inversa.

Reducir los pasos experimentales

Si el laboratorio solo realiza detección e identificación por PCR, se recomienda utilizar PCR cuantitativa fluorescente en lugar de PCR convencional.

Los resultados de detección de PCR cuantitativa de fluorescencia se pueden recopilar y analizar mediante señales fluorescentes, por lo que no es necesario abrir la tapa para la electroforesis después de la reacción, lo que evita la contaminación de los productos de PCR causada por la fuga de productos de reacción para formar aerosoles.Si aumenta el número de aperturas de la tapa durante el paso de carga de la electroforesis en gel, es probable que se produzca una contaminación por aerosol.Se recomienda promover la aplicación de PCR cuantitativa y reemplazar gradualmente la PCR cualitativa.

Adoptar el sistema anticontaminación UNG

El sistema de contaminación del producto anti-PCR UNG se utiliza para la reacción de PCR.

El sistema usa dUTP en lugar de dTTP.Después de la reacción de PCR, todos los productos de PCR (fragmentos de ADN) se incorporan con dUTP;en la siguiente ronda de reacción de PCR, la enzima UNG añadida al sistema se incuba a 37 °C durante 5 minutos antes de la PCR, que puede ser específica. Degradar todos los fragmentos de ADN que contienen dUTP y luego realizar la reacción de PCR.Esto puede eliminar por completo la contaminación por aerosol causada por los productos de PCR.El efecto se muestra en la siguiente figura:

Nota: Para la serie PCR directa, puede elegir los productos de la serie del sistema de contaminación de productos anti-PCR de FJ Biotech

Sugerir

Para los laboratorios que realizan pruebas de genotipado a gran escala, se recomienda encarecidamente utilizar el sistema de contaminación de productos anti-PCR UNG para analizar reactivos además de la construcción de laboratorios razonables.

Recordatorio: El uso de este sistema no puede eliminar la contaminación del producto PCR que ya se ha producido.Por lo tanto, el sistema UNG debe usarse al comienzo de la prueba correspondiente, y el sistema UNG siempre debe usarse para la amplificación de PCR, a fin de evitar la contaminación de los productos de PCR.Falso positivo.

Se recomienda utilizar el sistema Direct PCR-UNG de Forge Biotech al realizar pruebas a gran escala, como: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;

Kit de PCR directo de semillas de plantas-UNG;

Kit de PCR directo de tejido animal-UNG;

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG。

Esta serie de kits de Foregene no solo puede realizar una detección de PCR rápida y a gran escala, sino que también previene y controla de manera efectiva la contaminación del producto de PCR.