Kit de aislamiento de ADN con hisopo bucal/tarjeta FTA Kit de extracción o purificación de ADN genómico a partir de hisopos bucales
Descripción del equipo:
Purifique rápidamente ADN genómico de alta calidad a partir de muestras de hisopos bucales/tarjetas FTA.
◮Sin contaminación por ARNasa:La columna DNA-Only proporcionada por el kit permite eliminar el ARN del ADN genómico sin agregar RNasa durante el experimento, lo que evita que el laboratorio se contamine con RNasa exógena.
◮Rápida velocidad:Foregene Protease tiene una actividad más alta que las proteasas similares y digiere las muestras de tejido rápidamente;la operación es simple y la operación de extracción de ADN genómico se puede completar en 20-80 minutos.
◮Conveniente:La centrifugación se realiza a temperatura ambiente y no es necesario centrifugar a baja temperatura a 4 °C ni precipitar el ADN con etanol.
◮Seguridad:No se requiere extracción de reactivos orgánicos.
◮Alta calidad:El ADN genómico extraído tiene fragmentos grandes, sin ARN, sin ARNasa y con un contenido de iones extremadamente bajo, lo que puede cumplir con los requisitos de varios experimentos.
◮Sistema de microelución:Puede aumentar la concentración de ADN genómico, lo cual es conveniente para la detección o el experimento aguas abajo.
Descripción
Este kit proporciona un método eficaz y rápido para obtener ADN genómico de alta concentración a partir de hisopos bucales y tarjeta FTA (manchas de sangre).Usando nuestra empresa'La exclusiva columna de centrifugación con membrana de sílice solo para ADN y su fórmula, combinadas con Foregene Protease, permiten extraer ADN genómico de alta calidad y alta concentración en 80 minutos.La pequeña columna de purificación especialmente diseñada se une al ADN genómico y el ADN se puede eluir con una pequeña cantidad (15 μl) sistema de elución para aumentar la concentración del ADN genómico obtenido, lo cual es conveniente para la detección o el experimento aguas abajo.El kit puede procesar una o más muestras a la vez, y el proceso de purificación no requiere la extracción de sustancias orgánicas como fenol, cloroformo y la precipitación con isopropanol o etanol que requiere mucho tiempo, y la operación es simple y ahorra tiempo.
Especificaciones
50 preparaciones
Componentes del equipo
| Tampón ST1 |
| Tampón ST2 |
| Acrilamida lineal |
| Búfer PW |
| Balance de blancos tampón |
| Tampón EB |
| proteasa foránea |
| Columna de solo ADN |
| Instrucciones |
Características y ventajas
-Sin contaminación por RNasa: La Columna Solo ADN proporcionada por el kit permite eliminar el ARN del ADN genómico sin agregar RNasa durante el experimento, evitando que el laboratorio se contamine con RNasa exógena.
-Velocidad rápida: Foregene Protease tiene una mayor actividad que las proteasas similares, digiere las muestras rápidamente;operación simple.
-Conveniente: la centrifugación se realiza a temperatura ambiente y no es necesario centrifugar a baja temperatura a 4 °C ni precipitar el ADN con etanol.
-Seguridad: No se requiere extracción de reactivos orgánicos.
-Alta calidad: el ADN genómico extraído tiene fragmentos grandes, sin ARN, sin ARNasa y un contenido de iones extremadamente bajo, lo que puede cumplir con los requisitos de varios experimentos.
-Sistema de microelución: puede aumentar la concentración de ADN genómico, lo cual es conveniente para la detección o el experimento aguas abajo.
Aplicación de kits
Es adecuado para la purificación de ADN genómico de las siguientes muestras: hisopos bucales, tarjeta FTA (manchas de sangre).
Almacenamiento y vida útil
-Este kit se puede almacenar durante 12 meses en condiciones secas a temperatura ambiente (15-25°C);si necesita almacenarse por un período de tiempo más largo, puede almacenarse a 2-8°C.
Nota: Si se almacena a baja temperatura, la solución tiende a precipitarse.Antes de usar, asegúrese de colocar la solución en el kit a temperatura ambiente durante un período de tiempo.Si es necesario, precaliéntelo en un baño de agua a 37°C durante 10 minutos para disolver el precipitado y mézclelo antes de usarlo.
-La solución Foregene Protease tiene una fórmula única, que es activa cuando se almacena a temperatura ambiente durante mucho tiempo (3 meses);su actividad y estabilidad será mejor cuando se almacene a 4°C, por lo que se recomienda almacenarlo a 4°C, recuerda no mantenerlo a -20°C.
La columna de purificación está obstruida.
En este kit, en la operación de extracción de ADN genómico, la columna de purificación se adsorbe directamente en la mezcla de lisis enzimática de la muestra sin el paso de centrifugación, y la columna de purificación puede bloquearse debido a una enzimación incompleta y una alta viscosidad de la muestra.
Las siguientes posibles causas son las siguientes:
1. Digestión enzimática incompleta de muestras de tejido.
Recomendación: El tiempo de procesamiento de la muestra de Foregene Protease se puede extender adecuadamente o se puede tomar el sobrenadante después de la centrifugación a 12 000 rpm (~13 400 × g) durante 5 min.
2. Uso excesivo de muestras de tejido o tejidos grandes.
Recomendación: Es mejor no exceder 1 hisopado bucal en la muestra;si la muestra es demasiado grande, aumente la dosis de tampón ST1, Foregene Protease, tampón ST2 en consecuencia.
3. La viscosidad de la muestra es demasiado alta.
Recomendación: las muestras se pueden diluir adecuadamente con 10 mM de Tris-HCl antes de la extracción de ADN genómico.
4. Se han succionado fragmentos de la tarjeta de sangre.
Recomendación: El tiempo de centrifugación transitoria del paso 6 de la extracción genómica de la mancha de sangre (tarjeta FTA) puede extenderse adecuadamente.
Bajo rendimiento o sin ADN
A menudo, hay una variedad de factores que afectan el rendimiento del ADN genómico, incluido el origen de la muestra, las condiciones de almacenamiento de la muestra, la preparación de la muestra, la manipulación, etc.
El ADN genómico no se puede obtener durante la extracción.
Las posibles causas son las siguientes:
1. La conservación inadecuada de las muestras o el almacenamiento durante demasiado tiempo conduce a la degradación del ADN genómico.
Recomendación: Los hisopos orales preferiblemente deben ser muestreados recientemente, y no es recomendable utilizar hisopos preservados para operaciones de extracción de ADN genómico;las muestras de gotas de sangre deben garantizar que la calidad sea calificada y el tiempo de almacenamiento no debe ser demasiado largo.
2. Es posible que el uso de demasiado poco tejido no produzca la extracción del ADN genómico correspondiente.
Recomendación: siga las instrucciones de muestreo de hisopo bucal en la guía de operación y limpie tantas veces como sea posible para que se puedan unir suficientes células al hisopo oral para la extracción de ADN genómico;para la extracción de muestras de gotas de sangre, el área de corte de las gotas de sangre se puede aumentar adecuadamente.
3. Foregene Protease no se conserva correctamente, lo que provoca una disminución de su actividad o inactivación.
Recomendación: Confirme las condiciones de almacenamiento de Foregene Protease o reemplácela con una nueva Foregene Protease para reacción enzimática.
4. La conservación inadecuada del kit o el tiempo de almacenamiento es demasiado largo, lo que provoca la falla de algunos componentes del kit.
Recomendación: compre un nuevo kit de aislamiento de ADN con hisopo bucal para procedimientos relacionados.
5. El tampón WB no agrega etanol absoluto.
Recomendación: Confirme que el tampón WB agrega el volumen correcto de etanol absoluto.
6. El eluyente no se agrega correctamente a la película de silicona.
Recomendación: añadir gotas de eluyente precalentadas a 65 °C en el centro de la membrana de silicona y dejar a temperatura ambiente durante 5 min para aumentar la eficacia de elución.
ADN genómico de bajo rendimiento aislado
Las siguientes posibles causas son las siguientes:
1. La conservación inadecuada de las muestras o el almacenamiento durante demasiado tiempo conduce a la degradación del ADN genómico.
Recomendación: Los hisopos orales se toman preferiblemente como muestras frescas y los hisopos conservados no deben usarse para la extracción de ADN genómico.
2. Si la cantidad de muestra de tejido es demasiado pequeña, el contenido de ADN genómico extraído será menor.
Recomendación: siga las instrucciones para la toma de muestras de hisopos orales de la guía de funcionamiento, limpiando tantas veces como sea posible para que se puedan unir suficientes células al hisopo oral para la extracción de ADN genómico.
3. Foregene Protease no se conserva correctamente, lo que provoca una disminución de su actividad o inactivación.
Recomendación: Confirme las condiciones de almacenamiento de Foregene Protease o reemplácela con una nueva Foregene Protease para reacción enzimática.
4. Problemas de eluyentes.
Recomendación: Utilice Buffer EB para elución;si usa ddH2O u otros eluyentes, confirme que el pH del eluido está entre 7,0 y 8,5.
5. El eluato no se agrega gota a gota correctamente.
Recomendación: Añadir gotas de eluyente en el centro de la membrana de silicona y dejar a temperatura ambiente durante 5 min para aumentar la eficacia de elución.
6. El líquido de elución se acumula muy poco.
Recomendación: Use eluyente para la elución de ADN genómico como se requiere en las instrucciones, al menos no menos de 15 μl.
Baja pureza del ADN genómico aislado
La baja pureza del ADN genómico puede conducir al fracaso o a resultados insatisfactorios de los experimentos posteriores, como: las enzimas no se pueden cortar, la PCR no puede obtener el fragmento de gen de interés, etc.
Las posibles causas son las siguientes:
1. Contaminación por heteroproteínas, contaminación por ARN.
Análisis: La columna de purificación no se lavó con Buffer PW;la columna de purificación de lavado Buffer PW no se lavó utilizando la velocidad centrífuga correcta.
Recomendación: Asegúrese de que no haya precipitación en el sobrenadante antes de agregar etanol;asegúrese de lavar la columna de purificación de acuerdo con las instrucciones, y este paso no se puede omitir.
2. Contaminación por iones de impurezas.
Análisis: La columna de purificación de lavado con tampón WB se omitió o se lavó solo una vez, lo que resultó en una contaminación iónica residual.
Recomendación: asegúrese de lavar el Buffer WB 2 veces según las instrucciones para eliminar los iones residuales tanto como sea posible.
3. Contaminación de enzimas de ARN.
Análisis: Se añadieron RNasas foráneas al tampón;La operación de lavado de tampón PW fue incorrecta, lo que resultó en residuos de ARNasa, lo que afectó las operaciones experimentales de ARN posteriores, como la transcripción in vitro.
Recomendación: los kits de aislamiento de ácido nucleico de la serie Foregene pueden eliminar el ARN sin agregar RNasa adicional, por lo tanto, el kit de aislamiento de ADN con hisopo bucal/tarjeta FTA no necesita agregar RNasa;asegúrese de seguir las instrucciones para la columna de purificación de lavado Buffer PW, y este paso no se puede omitir.
4. Residuo de etanol.
Análisis: Buffer WB no realizó centrifugación en tubo vacío después de lavar la columna de purificación.
Recomendación: Realice la operación correcta de centrifugado en tubo vacío de acuerdo con las instrucciones.
5. Otra contaminación de impurezas.
Análisis: Las muestras guardadas o muestras especiales no se tratan previamente.
Recomendación: Pretrate minuciosamente la muestra según las instrucciones.
